西尼羅河病毒（WNV）核酸檢測試劑盒方法

西尼羅河病毒（WNV）核酸檢測試劑盒方法是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

反應(yīng)五要素:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	分類
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法	48T	PCR檢測試劑盒

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

1,5-萘二磺鈉英文名稱：1,5- naphthalene two sulfonic acidCAS號(hào)：1655-29-4分子式：332.25334分子量： C10H6Na2O6S2

聚(甲)硅烷支撐鈀/氧鋁混合催劑分子式：分子量：英文名稱：Poly (Jia Benji) silane supported palladium / alumina catalystCAS號(hào)：#$!!#

三氯三乙絡(luò)鋁分子式：247.51分子量： C6H15Al2Cl3英文名稱：Three chlorine three ethylCAS號(hào)：12075-68-2

間二(三氟甲)分子式：214.11分子量： C8H4F6英文名稱：Between two (three f) benzeneCAS號(hào)：402-31-3

對(duì)溴甲分子式：171.04分子量： C7H7Br英文名稱：To bromine tolueneCAS號(hào)：106-38-7

西瑞香素英文名稱：DaphnoretinCAS號(hào)：2034-69-7分子式：352.3分子量：C19H12O7

二磷酸鉀分子式：224.28分子量： C12H10KP英文名稱：Two phenyl potassium phosphateCAS號(hào)：15475-27-1

性蘭英文名稱：Acid blueCAS號(hào)：2379-74-0分子式：393.31分子量： C18H10Cl2O2S2

2,6-二氯-3-羥-4-吡甲醛分子式：192分子量： C6H3Cl2NO2英文名稱：2,6- two -3- hydroxy -4- pyridine formaldehydeCAS號(hào)：185423-26-1

N-CBZ-4-乙酸-分子式：277.32分子量： C15H19NO4英文名稱：N-CBZ-4- - piperidine acetateCAS號(hào)：63845-28-3

2-芐鹽酸鹽分子式：211.73分子量： C12H18ClN英文名稱：2- benzyl piperidine hydrochlorideCAS號(hào)：

西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法Rabbit Anti-mouse IgG  兔抗小鼠IgG 1mg

SRC  src原癌基因抗體 0.2ml

PACAP-38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.1ml

Smad3  細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml

phospho-JunB(Ser79)  磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.1ml

MICS1  生長激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體（真皮乳頭源性蛋白2） 0.2ml

BCL2L12  BCL2樣12含脯氨酸蛋白抗體 0.2ml

SV2A  突觸泡蛋白2A抗體 0.2ml

C1ORF74  1號(hào)染色體開放閱讀框74抗體 0.2ml

S100A11  S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體 0.1ml

ZNF217  鋅指脂蛋白217抗體 0.2ml

LASS1  長壽相關(guān)基因lASS1抗體 0.2ml