大腸桿菌（O157:H7）核酸檢測(cè)試劑盒方法

大腸桿菌（O157:H7）核酸檢測(cè)試劑盒方法是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶(hù)只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

反應(yīng)五要素:
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	分類(lèi)
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測(cè)試劑盒方法	48T	PCR檢測(cè)試劑盒

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                   1份

間溴氟分子式：175分子量： C6H4BrF英文名稱(chēng)：Bromo fluorobenzeneCAS號(hào)：1073-06-9

4,6-二甲-2-巰嘧分子式：140.21分子量： C6H8N2S英文名稱(chēng)：4,6- two methyl -2-CAS號(hào)：22325-27-5

戊菊酯英文名稱(chēng)：The cyanideCAS號(hào)：51630-58-1分子式：419.91分子量： C25H22ClNO3

7-羥喹啉分子式：145.16分子量： C9H7NO英文名稱(chēng)：7- hydroxy groupCAS號(hào)：580-20-1

3-溴三氟硼酸鉀分子式：262.9分子量： C6H4BBrF3K英文名稱(chēng)：3- Bromophenyl three kbf4CAS號(hào)：374564-34-8

堿性藍(lán)6B英文名稱(chēng)：Alkaline blue 6BCAS號(hào)：8004-90-8分子式：1231.42分子量： C74H59N6NaO7S2

2-甲-5-甲氧并噻唑分子式：179.24分子量： C9H9NOS英文名稱(chēng)：2甲- 5 -甲氧并噻唑CAS號(hào)：2941-69-7

2,6-二甲氧萘分子式：188.22分子量： C12H12O2英文名稱(chēng)：2,6- two aCAS號(hào)：5486-55-5

1,3-二硝-d4分子式：172.13分子量： C6D4N2O4英文名稱(chēng)：1,3- two nitrobenzene -d4CAS號(hào)：54247-05-1

4，5-二嘧分子式：110.12分子量： C4H6N4英文名稱(chēng)：4, 5- twoCAS號(hào)：13754-19-3

反式-4-(4-氟)-3-羥甲-1-甲分子式：223.29分子量： C13H18FNO英文名稱(chēng)：Trans -4- (4- difluorophenyl) -3- hydroxy -1- methyl piperidineCAS號(hào)：105812-81-5

大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測(cè)試劑盒方法HPV16-E7  人類(lèi)乳頭狀瘤病毒16-E7抗體 0.2ml

Donkey Anti-rabbit IgG/APC  APC標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml

Mouse Anti-human IgM/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗人IgM 0.1ml

CGP-39/YKL-40  軟骨糖蛋白39抗體 0.1ml

CDC2L6  細(xì)胞分裂周期2樣蛋白激酶6抗體 0.2ml

PCDHA7  原鈣粘附蛋白α7抗體 0.2ml

KIRREL1/NEPH1  腎病樣蛋白1抗體 0.2ml

C15orf62  15號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框62抗體 0.2ml

Alpha-ENaC  鈉通道蛋白α ENaC 0.2ml

Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml

Goat Anti-human IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml

AICDA  活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶抗體 0.2ml