羊特定基因序列（Ovine）核酸檢測(cè)試劑盒方法

羊特定基因序列（Ovine）核酸檢測(cè)試劑盒方法是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶(hù)只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

反應(yīng)五要素:
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	分類(lèi)
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測(cè)試劑盒方法	48T	PCR檢測(cè)試劑盒

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                   1份

氯錳分子式：197.91分子量： MnCI2•4H2O英文名稱(chēng)：Manganese chlorideCAS號(hào)：13446-34-9

2-乙酰噻唑分子式：127.16分子量： C5H5NOS英文名稱(chēng)：2- acetyl thiazoleCAS號(hào)：24295-03-2

1,2-萘二甲腈分子式：178.19分子量： C12H6N2英文名稱(chēng)：1,2- naphthalene twoCAS號(hào)：19291-76-0

過(guò)氧羥異丙分子式：152.19分子量： C9H12O2英文名稱(chēng)：Cumene hydroperoxideCAS號(hào)：80-15-9

二正辛砜分子式：290.51分子量： C16H34O2S英文名稱(chēng)：Two normalCAS號(hào)：7726-20-7

四氮唑蘭英文名稱(chēng)：Blue tetrazoliumCAS號(hào)：1871-22-3分子式：727.64分子量： C40H32Cl2N8O2

1--3-硝分子式：249.01分子量： C6H4INO2英文名稱(chēng)：1- -3-CAS號(hào)：645-00-1

二甲酚橙英文名稱(chēng)：Two xylenol orangeCAS號(hào)：1611-35-4分子式：716.62分子量： C31H32N2O13S:C3

2,2'-二硫二吡分子式：220.31分子量： C10H8N2S2英文名稱(chēng)：2,2'- two twoCAS號(hào)：82979

硫酸鋁分子式：666.43分子量： Al2(SO4)3·18H2O英文名稱(chēng)：Aluminium sulfateCAS號(hào)：7784-31-8

(-)-并四咪唑分子式：252.34分子量： C15H12N2S英文名稱(chēng)：（-）-并四咪唑CAS號(hào)：950194-37-3

Calpain 2  鈣激活的中性蛋白酶2抗體 0.1ml

HIPK3  Fas相互作用蛋白激酶3抗體 0.2ml

CAP57  中性粒細(xì)胞殺菌蛋白BP30抗體 0.2ml

Goat Anti-human IgM/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml

TMEM166  跨膜蛋白166抗體 0.2ml

Plectin  網(wǎng)蛋白抗體 0.2ml

NAIF1 protein  核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1 0.2ml

CDK9/Cyclin T1  周期素依賴(lài)性激酶9抗體 0.1ml

FAIM1  FAS凋亡抑制分子1抗體 0.2ml

ATG8/GABARAPL2  G1氨基A型受體相似蛋白2抗體 0.2ml

C17orf97  17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框97抗體 0.2ml

PIBF1/C13orf24  孕酮誘導(dǎo)阻斷因子1抗體 0.2ml