詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
動(dòng)物源性成分(18S)核酸檢測(cè)試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
動(dòng)物源性成分(18S)核酸檢測(cè)試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
動(dòng)物源性成分(18S)核酸檢測(cè)試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
3--4-羥吡水合物分子式:110.11分子量: C5H6N2O英文名稱:3- amino -4- hydroxy pyridine hydrateCAS號(hào):6320-39-4
新綠原英文名稱:Neochlorogenic acidCAS號(hào):906-33-2分子式:354.31分子量:C16H18O9
1,1-羰二(2-甲咪唑)分子式:190.2分子量: C9H10N4O英文名稱:1,1- carbonyl two (2-)CAS號(hào):13551-83-2
羥吳茱萸堿英文名稱:HydroxyevodiamineCAS號(hào):1238-43-3分子式:319.35718分子量:C19H17N3O2
甲硅油英文名稱:Methyl silicone oilCAS號(hào):分子式:分子量:
伏蟲(chóng)隆英文名稱:Volt wormCAS號(hào):83121-18-0分子式:381.1分子量: C14H6CL2F4N2O2
N-七氟丁酰咪唑分子式:264.1分子量: C7H3F7N2O英文名稱:N- seven fCAS號(hào):32477-35-3
貝萼皂苷元英文名稱:Shell sepal saponinCAS號(hào):6989-24-8分子式:488.7分子量:C30H48O5
(R)-2-(α-甲芐)-5-硝吡分子式:243.27分子量: C13H13N3O2英文名稱:(R) -2- (alpha methyl benzyl group) -5-CAS號(hào):64138-65-4
姬姆氏色素英文名稱:Ji MuCAS號(hào):51811-82-6分子式:291.8分子量: C14H14ClN3S
鉍試劑II英文名稱:Bismuth reagent IICAS號(hào):6336-51-2分子式:264.43分子量: C8H5KN2S3
P53 protein(wt-p53) 腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53) 0.1ml
HN protein 雞新城疫血凝素-神經(jīng)氨酸酶抗體 1ml
GABRA3/GABA A Receptor alpha 3 G氨基受體α3抗體 0.2ml
C17orf74 17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體 0.2ml
Visfatin-1(CT) 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體) 0.1ml
IQCA1 IQCA1蛋白抗體 0.2ml
RAB21 G蛋白家族RAB21蛋白抗體 0.2ml
KLHL26 Kelch樣蛋白26抗體 0.2ml
phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
M2-PK/PKM2 酸激酶-M2抗體 0.1ml
Anterior Gradient 2 前梯度同源蛋白2抗體 0.1ml
TM4SF3 跨膜蛋白4超家族成員3抗體 0.2ml