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牛腎細(xì)胞;MDBK技術(shù)參數(shù)

閱讀:218          發(fā)布時(shí)間:2017-8-10
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牛腎細(xì)胞;MDBK技術(shù)參數(shù):
細(xì)胞接受后處理
1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液 ,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
 
 2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
 
 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
 
 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
 
 5) 接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?br /> 
一.貼壁細(xì)胞  
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。 
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二.牛腎細(xì)胞;MDBK懸浮細(xì)胞 
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

三.2ml小管操作方法。 
1. 用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)。
2. 嚴(yán)格無菌操作,用吸管吸出管中細(xì)胞至6ml*培養(yǎng)基混勻。
3換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO7  培養(yǎng)。
人纖維蛋白溶酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Fibrinolysin    含量:    BR,5u/ul,99%
殼多糖酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Chitinase    含量:    BR,5u/ul,99%
羥基甾族化合物氧化還原酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    HSD    含量:    BR,5u/ul,99%
肌氨酸氧化酶    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    英文名稱:    Sarcosine Oxidase    含量:    BR,5u/ul,99%
牛腎細(xì)胞;MDBK

 

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