如果轉(zhuǎn)化細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞，像RAW264.7，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細(xì)胞時把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細(xì)胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。

將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細(xì)胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以zui大程度地把細(xì)胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。

因?yàn)榧?xì)胞生長的時候肯定是要相互，大部分的細(xì)胞都是要成片生長的，尤其是對于貼壁細(xì)胞，單個細(xì)胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細(xì)胞抱團(tuán)的話，傳代后細(xì)胞是不能貼壁的，這樣抱團(tuán)的細(xì)胞就會死亡。所以，消化傳代的時候一定要將細(xì)胞消化成單個單個的獨(dú)立狀態(tài)，這個啊是非?？季磕愕墓Ψ虻?！

細(xì)胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個，因?yàn)樗麤]有受力點(diǎn)了。很難找到受力點(diǎn)讓你對他吹打的力分散開細(xì)胞。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開，受力點(diǎn)就是細(xì)胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴(yán)格控制好消化的程度啊，這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來，又不能太過，一吹就整片脫落，要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細(xì)胞能夠都維持在好的受力點(diǎn)分散開。這個是很重要的一點(diǎn)。尤其是對于某些細(xì)胞這一點(diǎn)就是他死的致命點(diǎn)。像Caco-2細(xì)胞就是如此。

另外關(guān)于傳代很重要一點(diǎn)就是一定不能等到轉(zhuǎn)化細(xì)胞長滿的時候才去消化傳代。要在細(xì)胞長到70%左右的時候就要傳代了，一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進(jìn)行消化傳代。不能再拖了。
HPLC≥98%    （R型）原人參三醇    20mg/支    Protopanaxtriol    
HPLC≥98%    雪膽素甲    20mg/支    Curcurbitacin IIa    
HPLC≥98%    雪膽素乙    20mg/支    Curcurbitacin Iib    
HPLC≥98%    蔓荊子黃素    20mg/支    vitexicarpin    
HPLC≥98%    龍血素B    20mg/支    LOUREIRIN B    
HPLC≥98%    劍葉龍血素C    20mg/支    Cochinchinenin C    
HPLC≥98%    辛夷脂素    20mg/支    demethoxyaschantin    
HPLC≥98%    烏藥醚內(nèi)脂    20mg/支    Linderane    
HPLC≥98%    漆黃素(非瑟酮/紫鉚素)    20mg/支    Fisetin  
轉(zhuǎn)化細(xì)胞