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公司動態(tài)

轉化細胞冷凍前需注意的事項

閱讀:161          發(fā)布時間:2018-4-27

1、材料:
   轉化細胞生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(Sigma D-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、等速降溫機(KRYO10SeriesII)。
2、冷凍保存方法:
(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 
(2)程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。 
3、步驟: 
(1)冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):將DMSO加入新鮮培養(yǎng)基中,zui后濃度為5~10%,混合均勻,置于室溫下待用。
(3)依細胞繼代培養(yǎng)之操作,收集培養(yǎng)之細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
(4)離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝于已標示*之冷凍保存管中,1ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 
③adherent tumor lines:5~7×106,依細胞種類而異。Adenocarcinoma解凍后須較高之濃度,而HeLa只需1~3×106cells/ml 
④other suspensions:5~10×106cells/ml,human lymphocyte須至少5×106cells/ml。 
(5)冷凍保護劑濃度為5或10%DMSO,若是不確定轉化細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 

TLC法鑒別 千里光 中藥對照藥材 120964-200506 25g

TLC法鑒別 仙鶴草 中藥對照藥材 120966-200505 4.5g

TLC法鑒別 沒藥(天然沒藥) 中藥對照藥材 120967-200202 0.5g

TLC法鑒別 靈芝(赤芝) 中藥對照藥材 120968-200505 2.0g

TLC法鑒別 陳皮 中藥對照藥材 120969-200507 1.0g

TLC法鑒別 乳香 中藥對照藥材 120970-200403 0.5g

TLC法鑒別 南板藍根 中藥對照藥材 120971-200404 5g

TLC法鑒別 浙貝母 中藥對照藥材 120972-200404 1.0g

TLC法鑒別 黃芪(蒙古黃芪) 中藥對照藥材 120974-200508 3.0g
轉化細胞

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