正向選擇VS負(fù)向選擇轉(zhuǎn)化細(xì)胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負(fù)向選擇。正向選擇的試劑盒，使用與目標(biāo)細(xì)胞直接結(jié)合的抗體來(lái)進(jìn)行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細(xì)胞復(fù)合物提取出來(lái)，再通過(guò)二抗將磁珠與目標(biāo)細(xì)胞分開(kāi)。負(fù)向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠，不過(guò)這種試劑盒是通過(guò)去除樣品中的非目的細(xì)胞，來(lái)間接捕獲目的細(xì)胞。
這兩種細(xì)胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標(biāo)細(xì)胞的表面是否具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲，避免所獲得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染。如果你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的細(xì)胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志，那我們還是選用負(fù)向選擇的細(xì)胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的確定
通過(guò)PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn)，我們一般可以確定在目標(biāo)細(xì)胞上表達(dá)的篩選標(biāo)志。如果文獻(xiàn)中找不到適合自己的表面標(biāo)志，我們還可以用目標(biāo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的DNA序列進(jìn)行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會(huì)顯示，目標(biāo)細(xì)胞上可能表達(dá)的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細(xì)胞表面蛋白。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)一個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果會(huì)顯示該細(xì)胞是否表達(dá)CD4或CD8。在得知目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD4之后，我們可以先對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)免疫實(shí)驗(yàn)（如ELISA），以檢驗(yàn)BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實(shí)目標(biāo)細(xì)胞的確表達(dá)CD4，我們就可以用相應(yīng)試劑盒來(lái)篩選CD4陽(yáng)性的T細(xì)胞。
小鼠C肽(C-Peptide)      促尿鈉排泄肽前體CIgG    真菌 酵母菌
小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)      促卵泡刺激素受體IgG    霉菌 酵母菌
小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)     促卵泡刺激素IgG    真菌 酵母菌
小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)      促進(jìn)凋亡基因IgG    真菌 酵母菌
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)      促甲狀腺素受體IgG    真菌 霉菌 酵母菌
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)     促甲狀腺素受體IgG    真菌
小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)     促甲狀腺素受體（N端）IgG    Candida 酵母菌
小鼠IgG      促甲狀腺素受體（C端）IgG    霉菌 酵母菌
小鼠IgM      促甲狀腺素釋放激素IgG    酵母菌 霉菌
轉(zhuǎn)化細(xì)胞