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干細(xì)胞染色原理詳細(xì)解答
閱讀:787 發(fā)布時(shí)間:2017-11-15干細(xì)胞是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性。還常用于檢測細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞不會被染成藍(lán)色,而死細(xì)胞會被染成淡藍(lán)色。
臺盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬,故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。
步驟:(來自supergama)
1、4%臺盼藍(lán)母液:稱取4g臺盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時(shí)。用PBS稀釋至0.4%。(也可買Gibco的成品); T$ d& \! h% l, E) Z) A- W
2、胰酶消化貼壁細(xì)胞,制備單細(xì)胞懸液,并作適當(dāng)稀釋。
3、染色:細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻。(終濃度0.04%)
4、計(jì)數(shù):在三分鐘內(nèi),分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞。 1 e7 e* I* S) ^% X8 U$ K- _
5、鏡下觀察,死細(xì)胞被染成明顯的藍(lán)色,而活細(xì)胞拒染呈無色透明狀。
6、統(tǒng)計(jì)細(xì)胞活力:活細(xì)胞率(%)= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%
細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA 結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。嚴(yán)格來說,臺盼藍(lán)染色檢測的是細(xì)胞膜的完整性, 通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。這被稱為染料排除測試。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞,并可使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。
機(jī)理:正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。因此,借助臺盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中zui常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。
保存條件
室溫保存
說明
干細(xì)胞有潛在致癌危險(xiǎn)
高糖,含丙酮酸鈉和谷氨酰胺 DMEM DME培養(yǎng)基 10升
干酪素胰酶水解而成,培養(yǎng)基原材料 Peptone from Casein 酪蛋白胨 250
甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)配套試劑 Egg-Yolk Polymyxin B Solution 卵黃多粘菌素B溶液 50毫升
副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(yǎng) Alkaline Peptone Water 3%氯化鈉堿性蛋白胨水 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng) Tetracyline Examination Agar 四環(huán)素檢定瓊脂 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng) Sodium Chloride Sucrose Agar 氯化鈉蔗糖瓊脂 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng) Halophilic Bacteria Selective Agar 嗜鹽菌選擇性瓊脂 250克
副溶血性弧菌的溶血試驗(yàn) Sodium Chloride Blood Agar Base 氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ) 250克
干細(xì)胞