以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
CYP17抑制劑(TOK-001) | TOK-001 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
TOK-001是一種多功能的抗雄激素,是CYP17抑制劑,在去勢抵抗性前列腺癌中,IC50為47nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):851983-85-2 別名:VN/124-1;Galeterone;VN 124 純度:99.14% 分子量:388.55 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
桑葉盤孢胰高血糖樣肽-2(多肽抗原)Anti-ATRIP Antibodyδ樣蛋白1同源物(δLK1)
醋桿菌屬94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白(抗原)Anti-ATRX Antibodyδ-促睡眠肽(δSIP)
熱小鏈地芽孢桿菌膜粘連蛋白 A抗原Anti-ATXN2L Antibodyγ-谷酰轉(zhuǎn)移1(γGT1)
松針層孔菌*G蛋白(鳥苷結(jié)合蛋白)(抗原)Anti-AWAT1 Antibodyγ-谷酰水解(γGH)
豇豆慢生根瘤菌糖皮質(zhì)激受體 多肽Anti-ATXN7L1 Antibodyγ-谷?;D(zhuǎn)7(γGT7)
蘋果鏈格孢菌膜粘連蛋白-2抗原Anti-AVPR2 Antibodyγ-谷酰基轉(zhuǎn)6(γGT6)
弗雷德里克斯堡假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原)Anti-AVEN Antibodyγ-谷?;D(zhuǎn)5(γGT5)
蘇云金芽孢桿菌三磷鳥苷環(huán)水解(抗原)Anti-B3GALT2 Antibodyγ-谷?;D(zhuǎn)3(γGT3)
光伏希瓦氏菌H5N1流感病M2型(抗原)Anti-B3GALT1 Antibodyγ-谷?;D(zhuǎn)2(γGT2)
假單胞菌型肝炎病-C區(qū)(多肽)Anti-AZI2 Antibodyγ-谷酰環(huán)化轉(zhuǎn)移(γGCT)
乳桿菌屬型肝炎病-NS1(抗原)Anti-B3GLCT Antibodyγ-促脂解激(γLPH)
細(xì)鏈格孢型肝炎病-NS3(抗原)Anti-B3GALT4 Antibodyγ-基丁(γABA)
孟氏假單胞菌型肝炎病-NS4a(抗原)Anti-B3GLCT Antibodyβ-血小板球蛋白(βTG)
異常漢遜酵母戊型肝炎?。乖?/span>Anti-B3GNT2 Antibodyβ(βTC)
貪噬菌庚型肝炎?。乖?/span>Anti-B4GALNT1 Antibodyβ-位淀粉樣前體蛋白裂解2(βACE2)
棒桿菌屬聚組標(biāo)簽蛋白Anti-B4GALNT1 Antibodyβ-位淀粉樣前體蛋白裂解1(βACE1)
絲/蘇蛋白磷4C抗體鞘單胞菌人皮脂腺細(xì)胞
磷酯Cβ2抗體Chryseomicrobiumimtechense大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
豬圓環(huán)Ⅱ型衣殼蛋白Chryseomicrobiumamylolyticum人正常軟骨細(xì)胞
硫氧還蛋白過氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體Lysobacterruishenii人腎足細(xì)胞
CYP17抑制劑(TOK-001)肉桂鏈霉 烯
細(xì)孢毛霉 Camaric acid
釀酒酵母 Buergerinin G
矮棒曲霉 沙紙寧C
擬無枝酸屬 Borreriagenin
節(jié)桿 Boeravinone B
普通裂褶 2-脫氧-2,2-二氟-D-赤型-1-酮糖-3,5-二苯甲酰酯
谷棒桿Ⅳ型 1,6-二磷酸果糖鎂鹽
羊肚(不能訂購) 1,6-二磷酸果糖一鈣鹽
彩色豆馬勃 L-阿伯樹膠糖
平菇 麥芽四糖
水生恩氏 L-甘露糖
煙管 5-尿苷三磷酸二鈉鹽
滑假絲酵母 酮酸
蒼白堿線 針葉櫻桃提取物