Hedgehog(Hh)抑制劑(JK184)

Hedgehog(Hh)抑制劑(JK184)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Plexin B1/Semaphorin receptor/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白B1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
標(biāo)準(zhǔn)胎血清Multi-class antibodies規(guī)格： 200ml
人類(lèi)狀瘤病毒抗體 Anti-HPV 0.1ml
Goat anti-Rabbit I

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

賽洛蒙尼假單胞菌Nadsonia fulvescens

DesulfuromonasLipomyces starkeyi

洋蔥伯克霍爾德菌Nadsonia elongata

釀酒酵母Leucosporidium scottii

紫紅曲霉Filobasidiella neoformans

枯草芽孢桿菌Filobasidium capsuligenum

枯草芽孢桿菌Filobasidiella neoformans

檸檬桿菌屬Filobasidium uniguttulatum

軸向海山鹽單胞菌Aciculoconidium aculeatum

肺炎克雷伯氏菌Sympodiomyces parvus

釀酒酵母Sterigmatomyces halophilus

傳染性法氏囊病病Nadsonia fulvescens

交替紅色桿菌屬Nadsonia fulvescens

禾稈鐮孢霉Trigonopsis variabilis

仙臺(tái)鏈霉菌Sterigmatomyces halophilus

植物乳桿菌Sporidiobolus johnsonii

小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)免疫試劑盒載脂蛋白O抗體人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)藍(lán)萼甲

小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)欖香

小鼠內(nèi)皮1(ET-1)免疫試劑盒共濟(jì)失調(diào)性眼球運(yùn)動(dòng)功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體人轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT) 莨菪堿

小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)免疫試劑盒三號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框抗體人轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT) 老鸛草
Hedgehog(Hh)抑制劑(JK184)SLTM 英文名稱(chēng)： 雌激素誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)制器抗體 0.1ml

EGR2 英文名稱(chēng)： 早期生長(zhǎng)反應(yīng)蛋白2抗體 0.1ml

神經(jīng)肽 Y抗體 Anti-NPY Neuropeptide Y) 0.1ml

Anti-SLC16A3/MCT-4/FITC 熒光素標(biāo)記MCT4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser37) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml

ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg