以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
ATR抑制劑(AZ20) | AZ20 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
AZ20是一種有效的,選擇性的ATR抑制劑,IC50值為5nM;同時可抑制mTOR活性,IC50值為38nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1233339-22-4 純度:99.56% 分子量:412.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
柔嫩艾耳球蟲Escherichia coli大鼠白介1受體拮抗劑(IL1Ra)
薔薇枝枯病Escherichia coli大鼠白介1受體拮抗劑(IL1Ra)
根瘤菌Escherichia coli大鼠白介1受體拮抗劑(IL1Ra)
微小合軸酵母Escherichia coli大鼠胰島自身抗體(IAA)
皮奧亞類芽孢桿菌Escherichia coli大鼠胰島自身抗體(IAA)
多主葡萄座腔菌Escherichia coli大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
食用色堿性橙Ⅱ(王金黃)對照液Escherichia coli大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
可可里亞鎮(zhèn)鏈孢菌Escherichia coli大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)
果生鏈核盤菌Escherichia coli大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)
淺黃色芽胞八疊球菌Escherichia coli大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)
半裸法氏殼Escherichia coli大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)
腐皮鐮孢菌Escherichia coli大鼠前列腺F2α(PGF2α)
魯氏接合酵母Escherichia coli大鼠前列腺F2α(PGF2α)
桃樹葉細菌性穿孔病*Escherichia coli大鼠白三烯E4(LTE4)
普通變形桿菌Escherichia coli大鼠白三烯E4(LTE4)
多粘類芽孢桿菌Escherichia coli大鼠尿激(UK)
磷脂磷水解1抗體多帶革孔菌果子貍肺成纖維樣細胞
抑癌基因p16/p14/P19抗體中國擬迷孔菌大額牛皮膚細胞
過氧化還原5/6抗體木蹄層孔菌黃牛皮膚細胞
過氧化還原1抗體大孢薄孔菌牦牛皮膚細胞
ATR抑制劑(AZ20)乳酸芽孢桿 偶氮脒類引發(fā)劑V50
麥根腐平臍蠕孢 偶氮脒類引發(fā)劑V30
雙歧雙歧桿 辛辣內(nèi)酯A
曲霉屬 蒼耳亭
豬丹絲 虎掌草皂甙D
德爾布有孢酵母 鈀碳加氫催化劑
橙鱗傘 多被銀蓮花皂苷R8
鏈霉 1,3-二甲基脲
枯草芽孢桿 噻二酮苷
被孢霉屬 布魯諾廣譜高效劑
酮丁梭 噻二酮
產(chǎn)馬乳酒乳桿產(chǎn)馬乳酒亞種 液體生物防腐劑
解聚糖類芽孢桿 硫酸小檗堿
灰葡萄孢* 十烷基基
魯氏接合酵母 二氫小檗堿