以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
JNK抑制劑(AS601245) | AS601245 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
商品介紹:
AS601245是JNK抑制劑(hJNK1:IC50=150nM,hJNK2:IC50=220nM and hJNK3:IC50=70nM),具有神經(jīng)保護特性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:345987-15-7 純度:99.67% 分子量:372.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
茶樹菇Escherichia coli大鼠鈣/鈣調(diào)依賴性蛋白激2(CAMK 2)
赤曲霉Escherichia coli大鼠肝脂(HL)
阿維菌鏈霉菌*Escherichia coli大鼠肝脂(HL)
庫氏野野村氏菌Escherichia coli大鼠煙堿型乙酰受體(N-AChR)
白迷孔菌Escherichia coli大鼠煙堿型乙酰受體(N-AChR)
光滑青霉Escherichia coli大鼠蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
孟氏假單胞菌Escherichia coli大鼠蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
蘇云金芽孢桿菌加拿大亞種Escherichia coli大鼠活化蛋白C(APC)
鴨疫里氏桿菌Escherichia coli大鼠活化蛋白C(APC)
冷海水黃桿菌Escherichia coli大鼠甘肽/甘(GAL)
金龜子綠僵菌Escherichia coli大鼠甘肽/甘(GAL)
球形賴芽孢桿菌Escherichia coli大鼠α葡萄糖苷(a-Glu)
海洋海源菌Escherichia coli大鼠α葡萄糖苷(a-Glu)
魯氏酵母Escherichia coli大鼠破骨分化因子(ODF)
克羅諾桿菌屬Escherichia coli大鼠破骨分化因子(ODF)
斯氏假單胞菌Escherichia coli大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)
胰脂肪相關蛋白1抗體青孢鏈霉菌人肺轉化細胞
妊娠相關血漿蛋白A抗體尖孢鏈霉菌SK-GT-2
磷化酪抗體絨蓋干酪菌G418抗性的小鼠胚胎成纖維細胞(干細胞庫保藏)
蛋白C抑制因子抗體綠蓋粉孢牛肝菌小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞
JNK抑制劑(AS601245)裂褶 OED60K型發(fā)酵工業(yè)通用消泡劑
大腸埃希 聚氧乙烯月桂
短波單胞 人參皂苷Rk1
蘇云金芽孢桿鲇澤亞種 曲通x-114
假黃色單胞 曲通x-100
枯草芽孢桿枯草亞種 吐溫85
潔小菇 人參皂苷Rg6
尖角凸臍蠕孢 吐溫80
E.coli C600 金色酰酯
葡萄座腔 林澤蘭內(nèi)酯D
核盤 吐溫65
雅致小克銀漢霉 林澤蘭內(nèi)酯C
彎孢 吐溫60
尖孢鐮刀古巴專化型 吐溫40
大腸埃希氏桿 林澤蘭內(nèi)酯B