以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GlyT2-IN-1是甘氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLYT2抑制劑,是一種新型的機(jī)械傳導(dǎo)通道Piezo1激動(dòng)劑,作用于Piezo1-而非載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,引發(fā)Ca2+外流。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):448947-81-7 分子量:355.27 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
蝶呤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride8號(hào)染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
蝶呤二鈉鹽 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluvoxamine maleateCD73抗體包裝25g
磺丁脲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluvoxamine maleate軸突相關(guān)粘附分子抗體包裝500g
咪唑英文名稱: Formestane6型膠原蛋白α5抗體包裝1g
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formestane神經(jīng)粘附分子CALL抗體包裝5g
芬那(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fosinopril sodium中性粒殺菌蛋白BP30抗體包裝100ml
砜霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Furosemide21號(hào)染色體開放閱讀框56抗體包裝500ml
鈷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FurosemideT淋巴CD1抗體包裝50ml
磺地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gemfibrozil角蛋白5抗體包裝100g
磺倍他司?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gemfibrozil補(bǔ)體C9a抗體包裝25g
磺達(dá)沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gliclazide20號(hào)染色體開放閱讀框141抗體包裝1g
磺多拉司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gliclazide20號(hào)染色體開放閱讀框160抗體包裝5g
磺多沙唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glyburide/Gliebenclamide親環(huán)蛋白(親環(huán))40抗體包裝100g
磺酚妥拉明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glyburide/GliebenclamideT調(diào)控相關(guān)蛋白抗體包裝25g
磺吉米沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glimepiride突觸后蛋白CRIPT抗體包裝5g
白靈側(cè)耳(白靈菇)Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品相撲結(jié)合UBC9試劑盒無檸檬;Citric acid
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:干品純度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白試劑盒文多靈;Vindoline
pTargetFpTargetF 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定腺苷脫試劑盒五味子;Schisandrin
甘氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLYT2抑制劑(GlyT2-IN-1)香草乙酯Human
香葉丁酯Human, Mouse
硝-γ-丁酯Human
硝正戊酯Human, Mouse, Rat
辛二二乙酯Human
新戊酯Human
溴醋酯Human, Mouse, Rat
溴化-3-羥-1-吡啶二酯Human, Rat
溴乙異酯Human, Mouse