PI3K同工酶抑制劑(IC-87114)

PI3K同工酶抑制劑(IC-87114)公司正在出售的產(chǎn)品：RPLP0/FITC 熒光標(biāo)記性核糖體蛋白大亞P0抗體IgG
RRAD/FITC 熒光標(biāo)記RRAD抗體IgG
Runx3/FITC 熒光標(biāo)記新型抑癌因/一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌因抗體IgG
RUNX1/AML1/FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠急性髓白血病1蛋白抗體IgG
RUNX1/AML1(phospho Ser249) /FITC

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

腫大地桿菌Escherichia coli大鼠孤腓肽(OFQ/N)

潘諾尼亞鎖霉Escherichia coli大鼠蛋白磷(PP)

索氏梭菌Escherichia coli大鼠蛋白磷(PP)

井水螺狀菌Escherichia coli大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)

葡萄座腔菌屬Escherichia coli大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)

節(jié)桿菌Escherichia coli大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)

間型彎孢Escherichia coli大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)

玫瑰小雙孢菌玫瑰亞種Escherichia coli大鼠膠原II(Collagenase II)

熱帶假絲酵母Escherichia coli大鼠膠原II(Collagenase II)

腸沙門氏菌腸亞種Escherichia coli大鼠髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)

澳型核果褐腐病菌Escherichia coli大鼠髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)

嗜鹽芽孢桿菌屬Escherichia coli大鼠膠原I(Collagenase I)

哈茨木霉Escherichia coli大鼠膠原I(Collagenase I)

里氏木霉Escherichia coli大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)

細(xì)疣籃狀菌Escherichia coli大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)

硫氧化博斯氏菌Escherichia coli大鼠磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)

核糖體p70S6蛋白激抗體大斑凸臍蠕孢SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞（亞系）

P因子/備解抗體青霉菌人正常肝細(xì)胞并芘轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

過氧化活化增生受體γ抗體草青霉菌EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞

阿黑皮原抗體小月孢菌絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞
PI3K同工酶抑制劑(IC-87114)勒仔樹根瘤 葡聚糖T500

香蕉* 葡聚糖T200

根瘤 改良V-P培養(yǎng)基

印度毛霉 葡聚糖T110

短密青霉 葡聚糖T100

醋酸 葡聚糖T70

克瑞斯假絲酵母 葡聚糖T50

白腐盾殼霉 胰酪胨大豆多粘肉湯基礎(chǔ)

枇杷鏈格孢 葡聚糖T20

陰溝腸桿 葡聚糖T11

大腸埃希 甘露卵黃多粘瓊脂基礎(chǔ)（MYP）

盤長孢狀盤孢 葡聚糖T10

抗射線鏈霉 葡聚糖T9

禾谷絲核 DNA甲基綠瓊脂基礎(chǔ)

支氣管敗血波氏 葡聚糖T7