Porcupine抑制劑(GNF-6231)

Porcupine抑制劑(GNF-6231)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Phospho-NPM (Ser4)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核仁磷酸蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-HBcAg/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝核心抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
CC趨化因子受體5/依賴激活T細(xì)胞分泌調(diào)

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
大腸埃希菌Bensingtonia sp.

分枝節(jié)桿菌Bensingtonia sp.

硫磺色節(jié)桿菌Bensingtonia sp.

黃色籃狀菌Cryptococcus aureus

長(zhǎng)雙歧桿菌Saccharomyces cerevisiae

草木棲劍菌Candida pseudorugosa

Lysinibacillus xylanilyticusSaccharomyces cerevisiae

Cryptococcus sp.

慢生根瘤菌Saccharomyces vini

基生梭孢殼Hansenula sp.

蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種Candida etlica

彎孢菌Candida utilis

綠色木霉Hansenula saturnus

黃曲霉Torulopsis candida

節(jié)狀鐮孢Saccharomyces sp.

柔嫩艾耳球蟲(chóng)Candida sp.

小鼠多巴D1受體(D1R)免疫試劑盒β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)羥基紅花黃色A

小鼠多巴(DA)免疫試劑盒β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)羥基積雪草苷

小鼠端粒(TE)免疫試劑盒癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)羥基積雪草

小鼠蕈堿型乙酰受體M2(mAChRM2)自身抗體免疫試劑盒血型抗原前體蛋白抗體人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)羥基酪
Porcupine抑制劑(GNF-6231)Septin 8 英文名稱： 細(xì)胞分化蛋白SEPT8抗體 0.2ml

Phospho-HER2 (Tyr1221) 英文名稱： 磷酸化HER2受體抗體 0.1ml

5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 Anti-5-HTT/SERT 0.1ml

Anti-VWF/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FRAP1/mTOR(Ser2448) 磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

CLCA4(Calcium-activated chloride channel 4) 鈣激活氯離子通道4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg