PDK1抑制劑（PDK1 inhibitor）

PDK1抑制劑（PDK1 inhibitor）公司正在出售的產(chǎn)品：p44/42 MAPK (phospho Thr202/Tyr204) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化絲裂原活化蛋白激1/2抗體IgG疊氮二苯酯 97%
MKK7/FITC 熒光標(biāo)記絲裂原活化蛋白激激7抗體IgG二苯次膦酰 98%
MKK7/FITC 熒光標(biāo)記絲裂原活化蛋白激MKK7IgG代二苯酯 97%
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以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

血桿菌人糖蛋白VIAnti-UBAC1 Antibody人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)

海洋桿菌人卵泡抑Anti-UBA5 Antibody人發(fā)動蛋白2(DNM2)

枯草芽孢桿菌人甲狀腺抗體Anti-UBA1 Antibody人發(fā)動蛋白2(DNM2)

屎腸球菌人兒茶Anti-UBA7 Antibody人著絲粒蛋白B(CENP-B)

Bacteroides sp.人半胱蛋白抑制劑/胱抑CAnti-UBAP2L Antibody人著絲粒蛋白B(CENP-B)

島生異擔(dān)子菌人乙酰受體抗體Anti-UBASH3B Antibody人巨噬激蛋白(MSP)

催娩克雷伯氏菌人5羥色Anti-UBE2D2 Antibody人巨噬激蛋白(MSP)

遲緩愛德華氏菌人抑制AAnti-UBE2A Antibody人雷帕霉靶蛋白(mTOR)

淡藍(lán)褐糖絲菌人性激結(jié)合球蛋白Anti-UBE2J1 Antibody人雷帕霉靶蛋白(mTOR)

蜂頭蟲草人脫氫表雄S7Anti-UBE3B Antibody人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)

熒光威克酵母人脫氫表雄Anti-UBE2D2 Antibody人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)

白僵菌人降鈣基因相關(guān)肽Anti-UBE2N Antibody人軟骨寡聚蛋白(COMP)

白色鏈霉菌白色變種人生長抑Anti-UBE2T Antibody人軟骨寡聚蛋白(COMP)

大腸埃希菌人生長激釋放多肽Anti-UBE4A Antibody人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)

根瘤菌人抑制BAnti-UBE3C Antibody人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)

乳桿菌屬人促甲狀腺釋放激Anti-UBQLN3 Antibody人高速泳動蛋白17(HMG-17)

腫瘤抑制基因UVRAG抗體白林地蘑菇AMVP

去泛化3抗體頭狀葡萄球菌Z1A5

突觸囊泡融合蛋白Unc18-3抗體河內(nèi)白曲H2H5

14號染色體開放閱讀框130抗體紅菇S-163-6
PDK1抑制劑（PDK1 inhibitor）豬丹絲 L-

滑假絲酵母 棉籽糖

枯草芽孢桿 馬來酸

黃銹傘 熒光鈉

發(fā)酵乳桿 百里

總狀毛霉 甲基綠

膠孢 氨基黑10B

鼠傷寒沙門氏 麗春紅S

黃柄曲霉 活性藍(lán) 19

黃曲霉 麥冬皂苷B

球孢白僵 毛萼結(jié)甲

黑曲霉 辣椒紅

蘋果黑腐皮殼 莫諾苯宗

木霉屬 鋅試劑

核桃盤二孢 貓眼草黃