產(chǎn)品屬性:
中文名稱(chēng):NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828
英文名稱(chēng):GMX1778
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
GMX1778(CHS-828)是NAMPT高效抑制劑,可抑制劑NAD_addition_的生化合成,IC50值小于25nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):200484-11-3 純度:99.65% 分子量:371.86 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
類(lèi)干酪乳桿菌基質(zhì)衍生因子1抗體Anti-PAK1 Antibody磷張力蛋白同源物(PTEN)
扶桑本森頓酵母SET結(jié)合蛋白1抗體Anti-PAK1 Antibody磷甲羥戊激(PMVK)
小孢毛霉生長(zhǎng)抑受體3抗體Anti-PAK1 Antibody磷肌-3-激催化亞基δ肽(PIK3Cδ)
鹽古桿菌鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體Anti-PAK3 Antibody磷肌-3-激催化亞基β肽(PIK3Cβ)
蘇云金芽孢桿菌胚胎干抑制蛋白Suz12抗體Anti-PAK6 Antibody磷肌-3-激2α肽(PI3K2α)
枯草芽孢桿菌神經(jīng)突觸1抗體Anti-PAK5 Antibody磷核糖甲酰甘脒合(PFAS)
大腸埃希氏菌磷化神經(jīng)突觸1抗體Anti-PANX2 Antibody磷核糖甘酰轉(zhuǎn)甲酰基(GART)
東邊纖細(xì)芽孢桿菌磷化神經(jīng)突觸1抗體Anti-PAPPA Antibody磷核糖咪唑羧化(PAICS)
卡察夫氏弧菌酪蛋白激Fyn(同步原癌基因)抗體Anti-PAPPA Antibody磷甘油酯激2(PGK2)
玫瑰產(chǎn)色鏈霉菌頂端體相關(guān)蛋白7抗體Anti-PAR4/Pawr Antibody磷甘油酯激1(PGK1)
孔雀石(綠)鏈霉菌血清應(yīng)答因子結(jié)合蛋白1抗體Anti-Parkin(PARK2) Antibody磷甘油脫氫(PHGDH)
大腸埃希氏菌磷化血清應(yīng)答因子抗體Anti-PARK7 Antibody磷甘油變位5(PGAM5)
小笠原德克斯酵母應(yīng)激誘導(dǎo)磷蛋白1抗體Anti-PARK7 Antibody(PB0341)磷甘油變位4(PGAM4)
芽孢桿菌14號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框174Anti-PARK7 Antibody磷甘油變位1(PGAM1)
尖孢鐮孢中斷位點(diǎn)蛋白STIL抗體Anti-PARP2 Antibody磷甘露糖1(PMM2)
大腸桿菌紡錘體組裝異常蛋白6抗體Anti-PARN Antibody磷甘露糖1(PMM1)
谷受體NMDAζ1抗體布氏檸檬桿菌人角膜上皮細(xì)胞提取物
谷受體NMDAζ2抗體施氏葡萄球菌施氏亞種人體角膜成纖維細(xì)胞提取物
去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體糊精片球菌人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物
還原型輔Ⅱ氧化5/煙酰胺腺嘌呤二核苷磷抗體產(chǎn)硫球鏈菌人腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物
NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828釀酒酵母 凱林類(lèi)固急性調(diào)節(jié)蛋白Elisa
雅致曲霉 10-羥基脫1Elisa
支氣管敗血波氏 4,4'-二羥基二苯D型氨基酸氧化Elisa
少孢酵母 雌馬酚硫代酸Elisa
Bacillus tequilensis L-鼠李糖D型氨基酸氧化Elisa
豌豆根瘤 羅通定組蛋白去乙酰化1Elisa
美澳型核果褐腐病 3,4-二羥基甲酯Ca-Mg-ATPElisa
阿舒假囊酵母 佛波12-十四酸酯13-乙酸酯Ca-Mg-ATPElisa
深層大洋芽孢桿 普瑞巴林C肽Elisa
山羊豆根瘤 反式肉桂胰島(聯(lián)葉曉)Elisa
蠟狀芽孢桿 蒽醌-2-羧酸蛋白磷酸脂Elisa
發(fā)酵畢赤酵母 Chrysoeriol載脂蛋白AElisa
擬莖點(diǎn)霉 1-二氫茚酮載脂蛋白BElisa
長(zhǎng)孢被孢霉 重樓皂甙C甘油三酯水解Elisa
糙皮側(cè)耳 3-硝基-L-酪氨酸蛋白磷酸Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)