以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
BP-1-102是有的轉(zhuǎn)錄因子Stat3的小分子抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1334493-07-0 純度:99.23% 分子量:626.59 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
微桿菌屬白介-17抗原(人)Anti-GRID2 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
蠟狀芽孢桿菌胰島Anti-GRIN1 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
枯草芽孢桿菌重組人胰島因子Anti-GREM2 Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
筑波擬酵母胰島樣生長因子-II(抗原)Anti-GRIN2D Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
膠孢胰島樣生長因子-I(抗原)Anti-GRIN2D Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
弗雷德里克斯堡假單胞菌-3-乙偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GRK3 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
微小鏈霉菌白介-17抗原Anti-GRIN2B Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
彩色豆馬勃豬胰島Anti-GRK1 Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
擴(kuò)展青霉間粘附分子-2抗原Anti-GRM4 Antibody人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)
巴斯德畢赤酵母白介1α/IL-1αAnti-GRK7 Antibody人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種血藍(lán)蛋白Anti-GRK6 Antibody人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)
斑污擬盤多孔孢Ki-67Anti-GRM3 Antibody人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)
灰平鏈霉菌脂質(zhì)運(yùn)載蛋白Anti-GRM6 Antibody人抗人絨毛膜促性腺激抗體(AhCGAb)
釀酒酵母瘦Anti-GRM6 Antibody人抗人絨毛膜促性腺激抗體(AhCGAb)
淡紫擬青霉甲硝唑偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GSC Antibody人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)
費(fèi)比恩畢赤酵母與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物Anti-GSC2 Antibody人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)
DNA結(jié)合蛋白2抗體日本根霉人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子蛋白SIM2抗體側(cè)耳人胰腺癌細(xì)胞(干細(xì)胞庫保藏)
鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體綠色木霉貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞
鈣結(jié)合線粒體載體蛋白抗體粉紅木霉彌漫性組織淋巴瘤細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子Stat3小分子抑制劑(BP-1-102)硒砷芽孢桿 阿魏酸
庫德里阿茲威畢赤酵母 三聚酸
落葉松層孔 檸酸
枯草芽孢桿 肉桂酸
白靈側(cè)耳 α-溴異丁酸
赤曲霉 鎢酸
人參地土地桿 硅鎢酸
靈芝(紅芝, 赤芝) 鉬酸
異常漢遜酵母 丹寧酸
釀酒酵母 順-15-二十四碳單烯酸
普霍瓦富鹽 D-
佩特曲霉 DL-
猴頭 L-
米曲霉 1,5-二羥基萘
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 2,2-二羥基二硫代-6,6-聯(lián)萘