商品介紹:
IB-MECA是一種腺苷A3受體激動(dòng)劑,EC50值為0.11μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):152918-18-8 別名:Piclidenoson;CF-101 純度:98.97% 分子量:510.29 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
黃須腹菌神經(jīng)肽 Y(1-36)Anti-GUCY1B1 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)
黑附球菌神經(jīng)保護(hù)肽Anti-GUCY1B2 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)
雙孢蘑菇神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽Anti-GUSBP1 Antibody人抗核仁抗體(ANA)
瓊氏不動(dòng)桿菌土霉偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GZMB Antibody人抗核仁抗體(ANA)
多主葡萄殼菌土霉偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-GYPC Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
根瘤菌雞卵白蛋白Anti-GUF1 Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
豌豆根瘤菌抗腫瘤P53抗原Anti-GZMK Antibody人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)
淀粉鏈霉菌撲克蒙蛋白Anti-H1-5 Antibody人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)
褐色馬勃核糖體蛋白S6激1Anti-GZMH Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)
黃棕鏈霉菌蛋白AAnti-H1-0 Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)
Lasiodiplodia rubropurpureaP-糖蛋白抗原Anti-H1FOO Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)
束叢鏈霉菌磷化受體結(jié)合絲蘇激2Anti-H2AC11 Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)
深粘紅酵母萊克多巴與牛血清白蛋白偶聯(lián)物Anti-H1FOO Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)
達(dá)格斯坦鏈霉菌萊克多巴與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物Anti-H2AFX Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)
玉蕈(真姬菇)重組乙肝病表面抗原Anti-H2AC11 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
煙管菌Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)Anti-H2AC4 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK5抗體綠穗霉人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK6抗體根霉屬的種人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞
液泡蛋白分選受體SORCS2抗體三寶壟根霉人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子21抗體銀耳、白木耳人甲狀腺癌細(xì)胞HTh-7(干細(xì)胞庫(kù)保藏)
腺苷A3受體激動(dòng)劑(IB-MECA)黑曲霉 2-萘乙
鹽古桿 3-叔丁基-4-羥基苯甲
大腸埃希氏(大腸桿) 4,4-氧化偶氮苯甲
皮氏羅爾斯通氏 二苯砜
細(xì)鏈格孢 4,4-二羥基二苯砜
產(chǎn)朊假絲酵母 磷酸喹
放射形根瘤 喹啉硫酸鹽
球毛殼 8-羥基喹啉硫酸鹽
鐮刀 8-羥基喹啉銅鹽
總狀毛霉 2-羥基喹啉
成團(tuán)泛 2,2-聯(lián)喹啉
釀酒酵母 4,7-二苯基-1,10-菲啰啉
釀酒酵母 2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲啰啉
玫瑰皮黃鏈霉 苯并喹啉
淺灰鏈霉 2,9-二甲基-1,10-菲羅啉