雙重PI3K/mTOR抑制劑(GNE-477)

雙重PI3K/mTOR抑制劑(GNE-477)公司正在出售的產(chǎn)品：ANti-PDCD4/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豬IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
抑癌基因抗體 Anti-DMBT1 1ml
Rabbit Anti-

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
異常漢遜酵母Bacillus cereus

丁香直絲鏈霉菌Bacillus cereus

細(xì)交鏈孢菌Bacillus cereus

沃氏富鹽菌Bacillus cereus

南海棲砂桿菌Bacillus cereus

黃傘Bacillus cereus

枯草芽孢桿菌Bacillus cereus

榮州假黃單胞菌Bacillus cereus

枯草芽孢桿菌Bacillus cereus

臭黃菇Bacillus cereus

靈芝Bacillus cereus

地衣芽孢桿菌Bacillus cereus

Deinococcus xibeiensis Wang et al. Bacillus cereus

TA102 鼠傷寒沙門氏菌Bacillus cereus

薄花邊傘Bacillus cereus

類芽孢桿菌屬Bacillus mycoides

豬維生D(VD)免疫試劑盒α/β水解4抗體人巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)蝙蝠葛諾林堿

豬褪黑(MT)免疫試劑盒ADCK2蛋白抗體人巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)蝙蝠葛苷

豬透明質(zhì)(HA)免疫試劑盒乙脫氫16家庭A1抗體人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)蝙蝠葛蘇林堿

豬鐵蛋白(FE)免疫試劑盒粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)蝙蝠葛新諾林堿
雙重PI3K/mTOR抑制劑(GNE-477)Selenoprotein W 英文名稱： 硒蛋白W抗體 0.1ml

ECHDC2 英文名稱： 烯酰水合酶含結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml

硒蛋白W抗體 Anti-Selenoprotein W 0.1ml

Anti-phospho-Tau protein (Ser422)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser59) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml

AQP5(aquaporin Protein-5) 水通道蛋白-5抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg