以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Rucaparib是PARP的抑制劑,對(duì)PARP1的Ki值為1.4nM。也可結(jié)合PARP其他八個(gè)結(jié)構(gòu)域。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1859053-21-6 純度:99.30% 分子量:555.66 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)ELISA Kit英文名稱:GDNF ELISA KitBcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體包裝250mg
脂氧合同工1(LOX-1)ELISA Kit英文名稱:LOX-1 ELISA Kitβ淀粉樣肽1-42抗體包裝1g
脂聯(lián)(human adiponectin)ELISA Kit英文名稱:human adiponectin ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白抗體包裝5g
脂聯(lián)(Adiponectin/Acrp30)ELISA Kit英文名稱:Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit程序性死亡配體1抗體包裝250mg
脂聯(lián)(Adiponectin,Acrp30)ELISA Kit英文名稱:Adiponectin,Acrp30 ELISA Kit程序性死亡配體1抗體包裝1g
脂聯(lián)(Adiponectin)ELISA Kit英文名稱:Adiponectin ELISA Kitβ淀粉樣肽(1-42)抗體包裝5g
脂肪合成(FAS)ELISA Kit英文名稱:FAS ELISA Kitβ淀粉樣肽(1-42)單克抗體包裝100g
胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA Kit英文名稱:IGFBP-3 ELISA Kit膽汁鹽輸出泵/ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11抗體包裝25g
血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA Kit英文名稱:PECAM-1/CD31 ELISA KitBSPRY蛋白抗體包裝5g
血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(PECAM1)ELISA Kit英文名稱:PECAM1 ELISA KitBAIAP2L2蛋白抗體包裝50mg
血小板/內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA Kit英文名稱:PECAM-1/CD31 ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝5MG
血小板/內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(PECAM1)ELISA Kit英文名稱:PECAM1 ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝25g
胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)ELISA Kit英文名稱:TARC/CCL17 ELISA Kit人β亞基人絨毛膜促性腺激(β HCG)抗體包裝5g
胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)ELISA Kit英文名稱:TAFA/CCL17 ELISA Kit鈣激活通道蛋白 α 1抗體包裝5ml
纖維連接蛋白(FN)ELISA Kit英文名稱:FN ELISA Kit鈣激活通道蛋白 α 1抗體包裝25g
凋亡增強(qiáng)核抗體干擾α4(IFNα4)Entospletinib (GS-9973) is an orally bioavailable, selective Syk inhibitor with
PARP抑制劑(Rucaparib Camsylate)絲/蘇激受體相關(guān)蛋白抗體反式肉桂 CINNAMALDEHYDE, trans-(AS)Human, Mouse
線粒體輔色C還原核心蛋白2抗體反式肉桂 CINNAMALDEHYDE, trans-(AS)Human
未分化胚胎干轉(zhuǎn)錄因子1抗體羥香茅 HYDROXYCITRONELLAL(AS)Human, Mouse
尾加壓2抗體羥香茅 HYDROXYCITRONELLAL(AS)Human
尾加壓2相關(guān)肽抗體DL-乙香茅酯 CITRONELLYL ACETATE, DL-(SG)Human
荊豆凝集1抗體D-香茅 CITRONELLOL, D-(SG)Human
泛相關(guān)蛋白1抗體(鼻咽癌相關(guān)因20蛋白)L-香茅 CITRONELLOL, L-(SG)Human, Mouse, Rat
廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體二氫月桂烯 CITRONELLENE, (+)-B-(SG)Human, Mouse, Rat
泛D抗體二氫月桂烯 CITRONELLENE, (+)-B-(SG)Human, Mouse, Rat