以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
SJB2-043抑制USP1/UAF1復(fù)合體,IC50為544nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):63388-44-3 純度:99.30% 分子量:275.26 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
芽孢桿菌青霉G偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-HDAC-4(internal) Antibody人抗BB抗體(BB-Ab)
雜色曲霉青霉G偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-HDAC-9(internal) Antibody人抗BB抗體(BB-Ab)
嗜鹽長(zhǎng)單胞菌 陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗原Anti-HCK Antibody人抗平滑肌抗體(ASMA)
多主枝孢Anti-HDAC1 Antibody人抗平滑肌抗體(ASMA)
淡紫灰鏈霉菌Anti-HDAC2 Antibody人抗肝膜抗體(LMA)
枯草芽孢桿菌Anti-HDAC1 Antibody人抗肝膜抗體(LMA)
黃褐環(huán)銹傘Anti-HDAC4 Antibody人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)
大腸埃希氏菌Anti-HDAC10 Antibody人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)
釀酒酵母Anti-HDAC5 Antibody人抗眼肌抗體(EMAb)
鹽田鹽單胞菌Anti-HDAC5 Antibody人抗眼肌抗體(EMAb)
大豆慢生根瘤菌Anti-HDAC5 Antibody人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)
黃曲霉Anti-HDAC7 Antibody人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)
大腸埃希菌?;桥悸?lián)牛血清白蛋白(β-基乙磺)Anti-HDGFL3 Antibody人抗內(nèi)因子抗體(IFA)
赭色栓菌熒光Cy5標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HELZ2 Antibody人抗內(nèi)因子抗體(IFA)
枯草芽胞桿菌枯草亞種熒光Cy5.5標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HES2 Antibody人抗磷脂抗體(Apl/APA)
田無(wú)鏈霉菌熒光Cy3標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HEXIM1 Antibody人抗磷脂抗體(Apl/APA)
唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集1抗體根霉屬的菌人胎盤絨膜癌細(xì)胞
溶質(zhì)載體蛋白家族35成員C2抗體中國(guó)臺(tái)灣根霉人子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞
轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體華根霉人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞
神經(jīng)元電壓門控鈉通道蛋白β2/Na+CPtypeIIβ抗體少根根霉人結(jié)直腸腺癌瘤株
USP1/UAF1復(fù)合體抑制劑(SJB2-043)枯草芽孢桿 鄰苯二甲酸氫
地下微球 鄰苯二甲酸氫
南雷夫松氏 芐脒鹽酸鹽
松口蘑 1,8-二羥基蒽醌
白色小環(huán)柄菇 1,4-二羥基蒽醌
鮑魚(yú)菇 苊醌
圍小叢殼 蒽醌
釀酒酵母 縮二脲
熱生腫塊芽孢桿 四氧嘧啶
蠟狀芽孢桿 羥基脲
巴氏蘑菇(姬松茸) 槲皮
葡萄汁酵母 尿囊
假單孢 膽紅
大豆慢生根瘤 尿
膠韌革 咔唑