BRAF(V600E/WT)和c-Raf抑制劑（CEP-32496）

BRAF(V600E/WT)和c-Raf抑制劑（CEP-32496）公司*的產(chǎn)品：Phospho-SHIP2 (Tyr1135)/FITC 熒光標(biāo)記化蛋白酪氨2抗體IgG
Phospho-SHIP2 (Ser576) /FITC 熒光標(biāo)記化蛋白酪氨2抗體IgG
Phospho-SHIP2 (Tyr542)/FITC 熒光標(biāo)記化蛋白酪氨2抗體IgG
Phospho-SHIP2 (Tyr9

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：BRAF(V600E/WT)和c-Raf抑制劑（CEP-32496）

英文名稱：CEP-32496

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

稻瘟病菌（都不提供）Pseudomonas aeruginosa大鼠鐵蛋白(FE)

衛(wèi)茅膏藥病Pseudomonas aeruginosa大鼠碳酐2(CA-2)

綠色木霉=木木霉Pseudomonas aeruginosa大鼠碳酐2(CA-2)

灰紫毛霉Pseudomonas aeruginosa大鼠色上皮衍生因子(PEDF)

波蘭青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠色上皮衍生因子(PEDF)

嬰兒配方乳粉 、左旋肉堿、?；?、肌 Pseudomonas aeruginosa大鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)

杰氏假單胞菌Pseudomonas aeruginosa大鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)

鹽古桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠抗(AT)

側(cè)耳Pseudomonas aeruginosa大鼠抗(AT)

耐寒短桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠胰島抗體(ICA)

紫色紅曲菌Pseudomonas aeruginosa大鼠胰島抗體(ICA)

短乳桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠腎損傷分子1(Kim-1)

乳酒假絲酵母Pseudomonas aeruginosa大鼠腎損傷分子1(Kim-1)

鹽沼鹽桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠抗單核抗體(AMA)

同合小克銀漢霉Pseudomonas aeruginosa大鼠抗單核抗體(AMA)

運(yùn)動節(jié)桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)

增殖細(xì)胞核抗原抗體生赤殼屬小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）

腺苷環(huán)化激活肽-27/38抗體互隔交鏈孢霉Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）

磷脂磷2C抗體瓜亡革菌人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）DYP0530（干細(xì)胞庫保藏）

配對盒基因1抗體細(xì)鏈格孢小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKZ-1（干細(xì)胞庫保藏）
BRAF(V600E/WT)和c-Raf抑制劑（CEP-32496）糙皮側(cè)耳 兩性電解質(zhì)

清酒假絲酵母 兩性電解質(zhì)

鱗貝云芝 7-乙氧基莫諾苷

枯草芽孢桿 兩性電解質(zhì)

金黃色葡萄球 兩性電解質(zhì)

山綠豆根瘤 11-O-羅漢果苷V

斯氏李斯特氏 兩性電解質(zhì)

海水希瓦氏 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）

秦氏蜜環(huán) 二咖啡酰菊苣酸

微紫青霉 EC肉湯

人蒼白桿 兩性電解質(zhì)

大腸埃希 3，4，5-三咖啡?？鼘幩?/span>

白地霉 5,7-二羥基色原酮

少根根霉戴爾變種 兩性電解質(zhì)

季也蒙畢赤酵母 兩性電解質(zhì) 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)