細(xì)胞滲透拼接抑制劑(Madrasin)

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
莫格球擬酵母Streptococcus salivarius兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

淡紫擬青霉Streptococcus mutans兔基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)

解淀粉周培瑾氏菌Streptococcus mutans兔基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)

黃孢鏈霉菌Ochrobactrum anthropi兔8-異構(gòu)前列腺(8-epi-PGF2α)

黑線Streptococcus bovis兔8-異構(gòu)前列腺(8-epi-PGF2α)

異常威克漢姆酵母Leuconostoc pseudomesenteroides兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)

孢小克銀漢霉輪生變種Streptococcus equinus兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)

釀酒酵母Enterococcus avium兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)

枯草芽孢桿菌Leuconostoc gelidum兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)

出芽短梗霉Propionibacterium jensenii兔子中性粒彈性蛋白(NE)

類馬鏈球菌Enterococcus gallinarum兔子中性粒彈性蛋白(NE)

釀酒酵母Mesorhizobium mediterraneum兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)

多主葡萄殼菌Ensifer meliloti兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)

噬幾丁質(zhì)菌屬Mesorhizobium amorphae兔子基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)

大麗輪枝孢Ensifer xinjiangense兔子基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)

黃曲霉Mesorhizobium ciceri兔子可溶性CD40配體(sCD40L)

瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體半透明黃單胞菌芽枝霉屬

促甲狀腺釋放激抗體茄鏈格孢（番茄早疫病菌）原小單孢屬菌種

Toll樣受體3抗體尖鐮孢黃瓜?；停ㄐ泵妫┱骨嗝?/span>

微管蛋白β3抗體枯草芽孢桿菌沙漠亞種芝麻莖點(diǎn)菌
細(xì)胞滲透拼接抑制劑(Madrasin)蘇云金芽胞桿九州亞種 胰激肽原

亨氏柄桿 再生纖維透析袋（2000）

貝氏葡萄座腔 N-(反式-環(huán)氧丁二?；?-L-亮-4-胍基丁基酰

冷桿 梭蛋白

平菇 纖維透析袋（50000）

費(fèi)氏中華根瘤 5-溴-3-基-β-D-吡喃半乳糖苷

嗜堿鹽乳桿 門冬酰

孟氏假單胞 氨肽抑制劑鹽酸鹽

郎比可假絲酵母 纖維透析袋（50000）

pVE5523 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟鹽酸鹽