以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CYM-5541(ML249)是選擇性的S1P3受體變構(gòu)激動劑,EC50值在72至132nM之間。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:945128-26-7 別名:ML249 純度:98.0% 分子量:316.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
川射干(標準品)英文名稱: 4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide磷化粘著斑激抗體包裝1g
川烏(標準品)英文名稱: 4-Nitrobenzyl alcohol磷化粘著斑激抗體包裝25g
川西獐牙菜(標準品)英文名稱: 4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green下頜發(fā)育不良綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體包裝5g
川芎(標準品)英文名稱: 5,5-Dimethyl-1,3-cyclohexanedioneFAM134B蛋白抗體包裝25g
川芎(標準品)英文名稱: 5-Fluorocytidine磷化范可尼貧血組蛋白A抗體包裝5g
川續(xù)斷皂苷VI(標準品)英文名稱: 5-Methylindole范可尼綜合征相關(guān)蛋白FANCC抗體包裝100g
川續(xù)斷皂苷乙(標準品)英文名稱: 5-NitroguaiacolFXYD離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子6抗體包裝25g
穿山(標準品)英文名稱: 6-Bromo-2-naphtholFyn結(jié)合蛋白抗體包裝5g
穿山龍(標準品)英文名稱: 6-Dimethylallylamino purine riboside鋅指蛋白FYCO1抗體包裝100g
穿心蓮(標準品)英文名稱: 6-MethylcoumarinFYTTD1蛋白抗體包裝25g
穿心蓮內(nèi)酯(標準品)英文名稱: 7-Aminocephalosporanic acidRNA結(jié)合蛋白9抗體包裝5g
船形烏頭(標準品)英文名稱: 8-Hydroxyquinaldine巖藻糖轉(zhuǎn)移11抗體包裝1g
垂盆草(標準品)英文名稱: 9,10-Dibromoanthracene干擾誘導(dǎo)蛋白15抗體包裝25g
椿皮(標準品)英文名稱: 9,9-Bis(4-hydroxyphenyl) fluorineP38相互作用蛋白抗體包裝5g
慈溪麥冬皂苷A英文名稱: Acid blue 29鈣粘樣蛋白28抗體包裝1g
鮑曼不動桿菌Acinetobacter│baunannii 質(zhì)量規(guī)格:進分,97%,一腎上腺髓質(zhì)前體試劑盒去氫鉤藤堿;Corynoxeine
: =DSM16930=LMG22726資源名稱: 羽扇豆蒼白桿菌 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測定;一物腎上腺髓質(zhì)試劑盒3-氫化去氫松苓;Dehydrotra
: ATCC9642CBS246.65CMI91855IFO6342NRRL3536資源名稱: 黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格:純度≥98%,BR腎上腺能a1A受體試劑盒羥基酪;3,4-Dihydroxyph
S1P3受體變構(gòu)激動劑(CYM-5541)性磷(AP)標記的羊抗小鼠IgM3-溴三氟 3-Bromobenzotrifluoride >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
辣根過氧化物標記的兔抗豬IgG3-溴三氟 3-Bromobenzotrifluoride >99.0%(GC)Human
膠體金標記的兔抗豬IgG2-溴三氟 2-Bromobenzotrifluoride >97.0%(GC)Human, Mouse, Rat
PE標記的兔抗豬IgG2-溴三氟 2-Bromobenzotrifluoride >97.0%(GC)Human
PE-CY5標記的兔抗豬IgG三溴 Bromotrichloromethane >98.0%(GC)Human, Mouse
PE-Cy7標記的兔抗豬IgG三溴 Bromotrichloromethane >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
生物標記的兔抗豬IgG4-溴 4-Bromotoluene >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
生物標記的兔抗大鼠IgG4-溴 4-Bromotoluene >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
辣根過氧化物標記的小鼠抗兔IgM3-溴 3-Bromotoluene >98.0%(GC)Human, Mouse