泛-Raf抑制劑(CCT196969)

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：泛-Raf抑制劑(CCT196969)

英文名稱：CCT196969

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

海球菌Mesorhizobium plurifarium兔子可溶性CD40配體(sCD40L)

枯草芽孢桿菌BMesorhizobium huakuii兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)

枯草芽孢桿菌Ensifer teranga兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)

大腸埃希氏菌Ensifer fredii兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)

立枯絲核菌Mesorhizobium tianshanense兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)

球孢白僵菌Azorhizobium caulinodans兔子B淋巴瘤因子2(Bcl-2)

北里胞菌Ensifer medicae兔子B淋巴瘤因子2(Bcl-2)

香菇Bradyrhizobium elkanii兔色上皮衍生因子(PEDF)

褐色鏈霉菌Bradyrhizobium japonicum兔色上皮衍生因子(PEDF)

溫特曲霉Rhizobium vitis兔抗糖蛋白抗體(GP)

大腸埃希菌Rhizobium rhizogenes兔抗糖蛋白抗體(GP)

中國香柱菌Rhizobium radiobacter兔抗單核抗體(AMA)

類產(chǎn)堿假單胞菌Rhizobium rubi兔抗單核抗體(AMA)

圍小叢殼Mesorhizobium loti兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)

豇豆慢生根瘤菌Ensifer saheli兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)

龔地弓形蟲Lactobacillus plantarum兔抗平滑肌抗體(ASMA)

調(diào)節(jié)染色體組裝激1抗體單孢霉(斜面）舟形毛殼

凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體反硝化產(chǎn)堿菌紫褐馬杜放線菌

組織型纖溶原激活劑抗體解脲沙雷氏菌紫紅鏈孢囊菌

踝蛋白抗體產(chǎn)硫硫桿菌（不提供）Roseomonas vinacea
泛-Raf抑制劑(CCT196969)藍(lán)灰異壁放線 葡萄糖脫氫

米曲霉 蔗糖

釀酒酵母 單寧

Neofusicoccum australe  植酸

植物乳桿 纖維透析袋（100000）

具核梭桿具核亞種 亮氨基肽

宇佐曲霉 腸激

枯草芽孢桿 纖維透析袋（100000）

灰褐柱絲霉 酸性磷酸