mRNA水平抑制劑(KNK437)

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

膜醭畢赤酵母Halomonas subglaciescola兔抗平滑肌抗體(ASMA)

硬皮地星Lactobacillus plantarum兔子白介9(IL-9)

蠟蚧菌Rhizobium radiobacter兔子白介9(IL-9)

白色短波單胞菌Lactobacillus plantarum兔載脂蛋白A1(apo-A1)

楊盤二孢（都不提供）Lactobacillus rhamnosus兔載脂蛋白A1(apo-A1)

pBudCE4.1Lactobacillus plantarum兔纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

大腸埃希氏菌Rhodobacter sphaeroides兔纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)

枯草芽孢桿菌Stenotrophomonas maltophilia兔纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

蠟狀芽孢桿菌Enterobacter aerogenes兔纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

高盧蜜環(huán)菌（可訂購(gòu)）Enterobacter aerogenes兔子白介2(IL-2)

靈芝Enterobacter aerogenes兔子白介2(IL-2)

海芋平臍蠕孢Enterobacter cloacae兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)

大毛霉Alcaligenes faecalis subsp. faecalis兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)

熱帶靈芝Salinicoccus roseus兔一氧化氮(NO)

腫囊腐霉Bifidobacterium thermophilum兔一氧化氮(NO)

腫塊芽孢桿菌屬Salinicoccus hispanicus兔補(bǔ)體蛋白3(C3)

腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體紫黑杜搟氏菌Deinococcus radiodurans

Toll樣受體6抗體白鉤鏈霉菌(白丘鏈霉菌)Salinicoccus luteus

Toll樣受體9抗體乳桿菌Rufibacter roseus

組織因子途徑抑制劑抗體尖鐮孢萎蔫?；停ㄐ泵妫┐竽c埃希氏菌DH5α/pET43.1a-PknA
mRNA水平抑制劑(KNK437)間型彎孢 纖維透析袋（100000）

竹瘤座 D-乳酸脫氫

農(nóng)藥測(cè)定浸提液 （固體） 甘油激

蕈青霉 纖維透析袋（300000）

釀酒酵母 銀杏內(nèi)酯A

梭屬 乙脫氫

居巖牙殖球 沒食子兒茶沒食子酸酯

釀酒酵母 普魯蘭