mTOR抑制劑（LY 303511 hydrochloride）

mTOR抑制劑（LY 303511 hydrochloride）公司正在出售的產(chǎn)品：HSA/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgG鎢鈉 CP,99.0%
Mouse YERSINIA PESTIS Monoclonal body /FITC 熒光標(biāo)記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體IgG4-氧 99%
Mouse IgA/FITC 熒光標(biāo)記兔抗小鼠Ig

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
分枝節(jié)桿菌人己糖激3Talaromyces flavus小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)

小毛克孢菌屬人血小板型磷果糖激Mycobacterium smegmatis小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)

畢赤酵母人尿苷二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移Bacillus alcalophilus小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)

根瘤菌人凋亡相關(guān)半胱肽4Bacillus amyloliquefaciens小鼠溶菌(LZM)

大腸埃希氏菌人吡哆/吡哆維生B6激Bacillus amyloliquefaciens小鼠溶菌(LZM)

黏液鞘單胞菌人二氫嘧啶樣2Bacillus amyloliquefaciens小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)

慢生根瘤菌人血清/糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激2Bacillus atrophaeus小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)

黃色籃狀菌人絲裂原活化蛋白激激6Bacillus amyloliquefaciens小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

蠟狀芽孢桿菌人吡哆/吡哆維生B6磷Bacillus amyloliquefaciens小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

釀酒酵母人T特異性鳥苷三磷Bacillus badius小鼠垂體腺苷環(huán)化激活肽(PACAP)

腸膜明串珠葡萄聚糖亞種人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1Bacillus badius小鼠垂體腺苷環(huán)化激活肽(PACAP)

印度洋鏈霉菌人D-乳脫氫Bacillus badius小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)

釀酒酵母人α1抗Bacillus badius小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)

韓國污泥單胞菌人激肽釋放1Bacillus benzoevorans小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)

黃溶鏈霉菌人激肽釋放6Bacillus carboniphilus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)

杰氏假單胞菌人磷化乙酰Acetobacter aceti小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)

信號通路Wnt4抗體蘇云金芽孢桿菌巴西亞種樹鼩胎皮膚成纖維樣細(xì)胞

信號通路Wnt6抗體蘇云金芽孢桿菌喀麥亞種幼蚊細(xì)胞

Verprolin同源結(jié)構(gòu)域包含蛋白3抗體蘇云金芽孢桿菌高麗亞種大鼠腎小球系膜細(xì)胞

富含脯同源蛋白1抗體蘇云金芽孢桿菌貴陽亞種小鼠小腦星形細(xì)胞
mTOR抑制劑（LY 303511 hydrochloride）罕見芽孢桿 甲基當(dāng)藥寧

海黃瓜樣桿 7-O-甲基白楊

酵母屬 3'-甲氧基-5'-羥基異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖

鹽地喜鹽芽孢桿 巨大戟

聚多曲霉 25-甲氧基-原人參三

谷棒桿 3-O-甲基沒食子酸

孔雀石（綠）鏈霉 5-甲基-7-甲氧基異黃酮

假蜜環(huán) 5-甲基糠

枯草芽孢桿枯草亞種 金松雙黃酮

鏈霉 角鯊烯

釀酒酵母 甲基異茜草－1－甲

長雙歧桿 肌

少根根霉原變種 伐侖克林

大腸埃希氏 甲基黃連堿

釀酒酵母 劍麻皂苷元