商品介紹:
PU-H71鹽酸鹽是Hsp90抑制劑,IC50為50nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 分子量:548.83 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員2(TRPV2)ELISA Kit英文名稱:TRPV2 ELISA Kit紅2,3 - 二磷甘油合成抗體包裝1g
轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員1(TRPV1)ELISA Kit英文名稱:TRPV1 ELISA Kit布氏桿菌菌體蛋白抗體包裝5g
轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族M成員4(TRPM4)ELISA Kit英文名稱:TRPM4 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝100ml
轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)ELISA Kit英文名稱:TGFβI ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝500ml
轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ(TGFβR2)ELISA Kit英文名稱:TGFβR2 ELISA Kit多聚合苷激3磷化抗體包裝25ml
轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅰ(TGFβR1)ELISA Kit英文名稱:TGFβR1 ELISA Kit癌易感基因1抗體包裝1ml
轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)ELISA Kit英文名稱:TGFβ3 ELISA KitBcl-2同源拮抗劑抗體包裝5ml
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)ELISA Kit英文名稱:TGFβ1 ELISA Kitβ3腎上腺能受體抗體包裝1g
主要堿性蛋白(MBP)ELISA Kit英文名稱:MBP ELISA Kit腦鈉/利鈉肽抗體包裝5g
軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA Kit英文名稱:Ntn1 ELISA KitBZW2蛋白抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子2A(CDKN2A)ELISA Kit英文名稱:CDKN2A ELISA Kit緩激肽B1受體抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子1A(CDKN1A)ELISA Kit英文名稱:CDKN1A ELISA Kit鈣激活通道蛋白α1抗體包裝250mg
周期依賴性激8(CDK8)ELISA Kit英文名稱:CDK8 ELISA Kit卵黃狀黃斑病蛋白2抗體包裝5g
重肽鐵蛋白(FTH)ELISA Kit英文名稱:FTH ELISA Kit絲/蘇蛋白激SAD-B抗體包裝1g
腫廇蛋白P63(TP63)ELISA Kit英文名稱:TP63 ELISA Kit鼻咽癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
去整合樣金屬蛋白19抗體肌肉生長抑制(MSTN)FRAX597 is a potent, ATP-competitive inhibitor of group I PAKs with IC50 of 8 nM
Hsp90抑制劑(PU-H71 hydrochloride)四
四十烷
四溴乙烷
無水乙烷
戊三硅烷
烯三硅烷
硝烷
辛三硅烷
雄烷