mTOR抑制劑(CZ415)

mTOR抑制劑(CZ415)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-NSE/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-human C3/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗人補(bǔ)體C3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
CD44抗體 Anti-CD44 0.1ml
Goat Anti-Mouse

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

熱栗色鏈霉菌Morganella morganii subsp. morganii

曲霉Ralstonia pickettii

短柄帚霉Delftia acidovorans

巨大芽胞桿菌Pseudomonas aeruginosa

韓國假單胞菌Pseudomonas putida

薄層菌屬Alcaligenes faecalis subsp. faecalis

釀酒酵母Pseudomonas oryzihabitans

植物乳桿菌Pseudomonas pseudoalcaligenes

釀酒酵母Pseudomonas putida

根瘤菌Pseudomonas synxantha

暗黑鏈霉菌Pseudomonas nitroreducens

金龜子綠僵菌Delftia acidovorans

淡紫擬青霉Pseudomonas aeruginosa

大腸埃希菌Pseudomonas nitroreducens

長枝木霉Pseudomonas fluorescens

蒙塔涅梨孢假殼Pseudomonas synxantha

轉(zhuǎn)化生長因子βTGFβ抗體脅狀擬內(nèi)孢霉解芳烴斯特蘭尼氏菌

轉(zhuǎn)化生長因子β2TGFβ2抗體須殼孢屬食五環(huán)芳烴新鞘菌

金屬蛋白組織抑制因子-1抗體N端芽枝孢霉屬延長微泡菌

金屬蛋白組織抑制因子-3抗體鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種肋生鹽弧菌
mTOR抑制劑(CZ415)ZSWIM3 英文名稱： ZSWIM3蛋白抗體 0.2ml

DERP6 英文名稱： 表皮源性蛋白6抗體 0.2ml

載脂蛋白H抗體 Anti-ApoH 0.1ml

Anti-AFP/FITC 熒光標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶A3+A4+A5抗體 規(guī)格 0.1ml

DP-I/DSP(desmoplakin I ) 橋粒斑蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg