DNA-PK特異抑制劑(LTURM34)

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

枯草芽胞桿菌Natrialba aegyptiaca兔血清總補體(CH50)

簇生黃韌傘Natrinema altunense兔乙酰受體抗體(AChRab)

尖孢鐮刀菌Natrinema altunense兔乙酰受體抗體(AChRab)

豇豆慢生根瘤菌Natrinema altunense兔誘導型一氧化氮合成(iNOS)

延長赤擔孢酵母Natrinema altunense兔誘導型一氧化氮合成(iNOS)

球孢毛殼Natrinema altunense兔熱休克蛋白90(HSP-90)

哈茨木霉Haloterrigena thermotolerans兔熱休克蛋白90(HSP-90)

緊縮花褶傘Haloterrigena thermotolerans兔熱休克蛋白70(HSP-70)

敵鼠鈉鹽速測包Natrinema altunense兔熱休克蛋白70(HSP-70)

堆形艾耳球蟲Natrinema altunense兔熱休克蛋白40(HSP-40)

向日葵殼針孢Natrinema altunense兔熱休克蛋白40(HSP-40)

薩赫里劍菌Halobiforma lacisalsi兔熱休克蛋白20(HSP-20)

彎孢菌Halorubrum xinjiangense兔熱休克蛋白20(HSP-20)

土曲霉Haloterrigena thermotolerans兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)

伯頓畢赤酵母Haloterrigena thermotolerans兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)

大腸埃希菌Haloterrigena thermotolerans兔組織因子途徑抑制物(TFPI)

絲/蘇激受體相關(guān)蛋白抗體長剛毛擬盤多毛孢芳香黃桿菌

UL16結(jié)合蛋白1蛋白抗體鄔氏不動桿菌胎兒彎曲菌空腸亞種

神經(jīng)細胞胞漿蛋白9.5抗體蛋白基因產(chǎn)物9.5水生叢毛單胞菌腔隙莫氏菌

葡萄糖神經(jīng)酰胺合成抗體異型德克酵母微黃色奈瑟氏菌
DNA-PK特異抑制劑(LTURM34)酵母 黃連堿

聚生殼 纖維透析袋（10000）

變幻青霉 小檗堿

總狀毛霉 鹽酸小檗堿

類動膠杜搟氏屬 鹽酸青藤堿

人參鏈格孢 纖維透析袋（10000）

Bacillus methylotrophicus  巖白菜

糙皮側(cè)耳 原花青

膠孢 柚皮