以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
MMP-13抑制劑(CL-82198) | CL-82198 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CL-82198是一個選擇性的MMP-13抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:307002-71-7 純度:98.03% 分子量:302.37 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
黑腐皮殼屬Lysinibacillus sphaericus蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)
平菇(白鮑魚菇)Lysinibacillus sphaericus牛檢測(acetone)
解脂假絲酵母Lysinibacillus sphaericus牛檢測(acetone)
藍(lán)灰色異壁放線菌Bacillus thuringiensis牛結(jié)核病抗體
葡萄座腔菌Bacillus thuringiensis牛結(jié)核病抗體
腸膜明串珠菌右旋葡聚糖亞種Bacillus thuringiensis荷蘭賽迪口蹄疫0型2板
釀酒酵母Bacillus thuringiensis荷蘭賽迪口蹄疫0型2板
蠟狀芽孢桿菌Bacillus thuringiensis口蹄疫結(jié)構(gòu)蛋白抗體
金黃色葡萄球菌Bacillus thuringiensis口蹄疫結(jié)構(gòu)蛋白抗體
阿德長西氏酵母Bacillus thuringiensis偽狂犬病gE2.0抗體診斷試劑盒
釀酒酵母Bacillus thuringiensis偽狂犬病gE2.0抗體診斷試劑盒
彭氏變形桿菌Bacillus thuringiensis藍(lán)耳病
釀酒酵母Bacillus thuringiensis藍(lán)耳病
不動桿菌Bacillus thuringiensis圓環(huán)病IgG
黑曲霉Bacillus thuringiensis圓環(huán)病IgG
斡氏假單胞菌Bacillus thuringiensis??谔阋卟?/span>
磷化活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體灰色產(chǎn)色鏈霉菌乙酰微小桿菌
磷化絲/蘇蛋白激NEK9抗體小金色鏈霉菌金色鏈霉菌
磷化谷受體2A抗體密蘇里游動放線菌瘡痂鏈霉菌
磷化細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體微白黃鏈霉菌柯恩氏菌
MMP-13抑制劑(CL-82198)Sin3b 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 0.2ml
eEF1A2 英文名稱: 翻譯延伸因子EF-1 α2抗體 0.2ml
α-輔肌動蛋白4抗體 Anti-α-ACTN4 0.1ml
Anti-HAS/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記人血清白蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FGFR1(Tyr653/654) 磷酸化堿性成纖維細(xì)胞生長因子受體1抗體 規(guī)格 0.1ml
CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2) 二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg