Mcl1高效抑制劑（Pyridoclax）

Mcl1高效抑制劑（Pyridoclax）公司正在出售的產(chǎn)品：DAT ELISA Kit 大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-TFPI/LACI 組織因子途徑抑制劑抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh GNRPX/PLEKHJ1 鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白X抗體 規(guī)格 0.2ml
DP

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

大腸埃希氏菌Arthrobacter sulfonivorans

泡盛曲霉Arthrobacter citreus

Marivirga sp.Arthrobacter nicotinovorans

草青霉Agromyces brachium

異常漢遜酵母Agromyces luteolus

金黃色葡萄球菌金黃亞種Geobacillus stearothermophilus

合適檸檬桿菌Geobacillus stearothermophilus

淡紫擬青霉Lactococcus lactis subsp. cremoris

雜色曲霉Agromyces mediolanus

四脊裸胞殼Delftia acidovorans

根瘤菌Rhodococcus erythropolis

假單胞菌屬Rhodococcus sp.

釀酒酵母Rhodococcus sp.

斑污擬盤多孔孢Rhodococcus sp.

蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種Rhodococcus sp.

熱帶假絲酵母Rhodococcus sp.

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子－1抗體硝鹽陰性不動(dòng)桿菌日本絲孢酵母

心肌肌球蛋白抗體α-myosin傷寒沙門氏菌解脂耶羅維亞酵母

細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體咽峽炎鏈球菌金色隱球酵母

Mcl1高效抑制劑（Pyridoclax）Synaptojanin 2 英文名稱： 磷酸肌醇磷酸酶蛋白INPP5H抗體 0.2ml

Estrogen Receptor alpha 英文名稱： 雌激素受體α抗體 0.1ml

組織蛋白酶D抗體 Anti-cath-D/CD/Cathepsin D 0.1ml

Anti-UCP-1/FITC 熒光素標(biāo)記線粒體脫偶連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-HMGCR(Ser872) 磷酸化三羥基三甲基原酶抗體 規(guī)格 0.1ml

CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg