PI3Kδ抑制劑（GSK2269557 free base）

PI3Kδ抑制劑（GSK2269557 free base）公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-SARS putative orflab polyprotein/FITC 熒光素標記SARS抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) ?？窠?jīng)毒素(35肽)Multi-class

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

地尿芽孢桿菌Clostridium beijerinckii

根瘤菌Rhodopseudomonas sp.

枯草芽孢桿菌Brevibacillus choshinensis

嗜鞣管囊酵母Natronococcus zabuyensis

路德類酵母Natrialba aibiensis

灰樹花1Brevibacillus borsensis

金黃殼囊孢菌Burkholderia gladioli

固囊酵母Halobacterium salinarum

聚多曲霉Vibrio parahaemolyticus

尖孢鐮孢Halorubrum vacuolatum

枝孢霉Salinibacillus aidingensis

P7（平菇類）Salinibacillus kushneri

白絲倫茨氏菌Salinibacillus kushneri

秦氏蜜環(huán)菌Halobacillus sp.

釀酒酵母Planococcus sp.

白假絲酵母Halobacillus sp.

磷化細胞信號轉(zhuǎn)導分子SMAD3抗體豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌柱孢霉屬

磷化突觸融合蛋白1抗體菲爾德斯隱球菌竹波鏈霉菌

磷化14-3-3α/β/ζ抗體小菌核屬菌種帚霉屬

磷化細胞信號轉(zhuǎn)導分子SMAD2抗體龜分枝桿菌龜亞種中間型鏈霉菌
PI3Kδ抑制劑（GSK2269557 free base）SMARCD3 英文名稱： 肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體 0.2ml

ETEA 英文名稱： T細胞和嗜酸性粒細胞表達特應性皮炎蛋白ETEA抗體 0.2ml

刺激分子B7-1蛋白抗體 Anti-CD80/B7-1 0.1ml

Anti-VEGFR-3/FITC 熒光素標記血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GATA1(ser310) 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.1ml

CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg