公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:CDK抑制劑(RGB-286638 free base)
英文名稱:RGB-286638 free base
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
RGB-286638是一種有效的CDK抑制劑,抑制cyclin T1-CDK9,cyclin B1-CDK1,cyclin E-CDK2,cyclin D1-CDK4,cyclin E-CDK3和p35-CDK5活性,IC50分別為1,2,3,4,5和5nM;同時可抑制GSK-3β,TAK1,Jak2和MEK1,IC50值分別為3,5,50,和54nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:784210-88-4 別名:RGB286638 free base 純度:99.55% 分子量:545.63 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母Brevibacillus brevis兔子白介3(IL-3)
鏈霉菌屬Brevibacillus parabrevis兔子白介3(IL-3)
地衣芽孢桿菌Brevibacillus borsensis兔子白介3(IL-3)
枯草芽孢桿菌Brevibacillus agri兔子白介1β (IL-1β)
擬卵蓋鵝膏菌Brevibacillus centrosporus兔子白介1β (IL-1β)
深紅酵母Brevibacillus formosus兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
炭疽芽胞桿菌Lactobacillus casei兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
釀酒酵母Brevibacillus reuszeri兔子白介10(IL-10)
釀酒酵母Lactobacillus buchneri兔子白介10(IL-10)
球孢白僵菌Lactobacillus casei兔子白介1(IL-1)
金針菇Lactobacillus sp.兔子白介1(IL-1)
墳?zāi)构?jié)桿菌Lactobacillus buchneri兔子S100B蛋白(S-100B)
澳型核果褐腐病菌Lactobacillus casei兔子S100B蛋白(S-100B)
細疣籃狀菌Lactobacillus buchneri兔子S100蛋白(S-100)
柑橘青霉菌Burkholderia cepacia兔子S100蛋白(S-100)
棘孢木霉Ralstonia pickettii兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)
信號通路Wnt2B抗體高溫單孢菌韋恩沙門氏菌
WEE1蛋白抗體淡色叢赤殼(斜面)圖萊亞爾沙門氏菌
信號通路Wnt3a抗體榆干側(cè)耳于克勒沙門氏菌
黃氧化抗體綿皮臥孔菌索伊蘭格沙門氏菌
CDK抑制劑(RGB-286638 free base)黃曲霉 α-葡萄糖苷
氧化烴假諾氏 β-葡萄糖苷
釀酒酵母 β-葡萄糖苷酸
小葉相思根瘤 半纖維
腐皮鐮孢(三七根腐?。?/span> 木犀草苷
梅花狀青霉 木犀草
谷棒桿 纖維(綠色木霉)
腐皮鐮孢 內(nèi)酯甲
釀酒酵母 纖維(綠色木霉)
黃傘 紅
黃桿屬 化溶
尾孢屬 乙
長柄鏈格孢 溶葡球
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 溶(蛋清)
產(chǎn)朊假絲酵母(6個工作日) 甲