ALK/Ack1抑制劑(KRCA-0008)

ALK/Ack1抑制劑(KRCA-0008)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Proteasome 20S LMP7 /FITC 熒光素標(biāo)記低分子質(zhì)量蛋白7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-MK IgM Whole serum 兔抗猴IgM抗血清Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml
白介素2抗體 Anti-IL-2

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
黑木耳(神龍A8)Haloferax volcanii

球孢枝孢Halosarcina pallida

小紅酵母Haloferax lucentensis

畢赤酵母Haloferax lucentensis

立枯絲核菌Haloferax alexandrinus

枯草芽孢桿菌Haloferax volcanii

運(yùn)動節(jié)桿菌Haloferax prahovense

FlavihumibacterHalosarcina sp.

毛柄金錢菌(金針菇)Haloferax lucentensis

屎腸球菌Halosarcina pallida

皺紋單胞菌Halosarcina pallida

枯草芽孢桿菌Halosarcina pallida

沙氏艾耳球蟲Corynebacterium glutamicum

枯草芽孢桿菌Enterobacter aerogenes

釀酒酵母Corynebacterium glutamicum

柔嫩艾耳球蟲Corynebacterium glutamicum

小鼠鹽轉(zhuǎn)運(yùn)三磷腺苷抗體人胰島樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)斷血流皂苷A

小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)免疫試劑盒精tRNA的蛋白轉(zhuǎn)移1抗體人胰島樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)對二甲基甲

小鼠組織型纖溶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒共濟(jì)失調(diào)蛋白7樣1抗體人胰島樣生長因子2(IGF-2)對甲氧基甲

小鼠組織多肽抗原(TPA)免疫試劑盒孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體（自閉癥相關(guān)蛋白1）人胰島樣生長因子2(IGF-2)對甲氧基肉桂乙酯
ALK/Ack1抑制劑(KRCA-0008)Phospho-Smad2(Ser465 + Ser467) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 0.1ml

phospho-eIF4EBP1 (Thr36) 英文名稱： 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml

蛋白激酶N2抗體 anti-PKN2 0.1ml

Anti-Phospho-Syk (Tyr323) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MLK3(Thr277/Ser281) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MLK3抗體 規(guī)格 0.1ml

H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg