以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
R-equol是ERα和ERβ的激動(dòng)劑,Ki值分別為27.4和15.4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):221054-79-1 別名:(+)-Equol 分子量:242.27 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
小鼠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒 ,英文名: GDNF ELISA Kit
牛結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒BovineHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T
人apelin 13(AP13)免疫試劑盒 Human apelin 13,AP13 ELISA Kit
英文名稱MouseIerleukin-3,IL-3ELISAKIT小鼠白介素3(IL-3)規(guī)格:96T/48T
冰凍切片中性脂質(zhì)油紅O染色試劑盒50次
Ratcholesterolesteransferprotein,CETPELISA試劑盒大鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-13 ELISA Kit
大鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA檢測試劑盒RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit 96T/48T
人Salusin Beta(Salusin β)免疫試劑盒 Human Salusin Beta,Salusin β ELISA Kit
英文名稱MouseFIIELISAKit小鼠凝血因子II(FII)規(guī)格:96T/48T
White*培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
rabbitplateletactivatingfactor,PAFELISA試劑盒兔子血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human calcitonin gene related peptide (CGRP) ELISA Kit 人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒
PorcineEsadiol,E2ELISAKIT 豬雌二醇(E2)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAMAIgA(Humanai-myelinaibodyIgA)ELISAKit人抗髓磷脂抗體IgA規(guī)格:48T/96T
血液還原型谷胱甘肽(GSH)濃度比色法定量檢測試劑盒50次
PlaVitaminD3,VD3ELISAKit植物D3(VD3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ERα和ERβ激動(dòng)劑((R)-Equol)SLC34A2 英文名稱: 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.1ml
FOXO1A 英文名稱: 叉頭蛋白O1抗體 0.2ml
一種細(xì)胞應(yīng)激分子抗體 Anti-MICA 0.1ml
Anti-RXR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記核受體RXRα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PERK(Thr980) 磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
bovine Insulin protein 胰島素蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 10mg