以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Beclabuvir是HCVNS5B RNA-依賴性RNA聚合酶抑制劑,也可抑制HCV基因型1,2,4,5表達的NS5B蛋白活性,IC50值均<28nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:958002-33-0 別名:BMS-791325 純度:99.81% 分子量:659.84 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
熊果;烏蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Pipecolic acid HDHD2B蛋白抗體包裝5g
繡線菊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Norvaline造血干特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體包裝10MG
溴東莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-tert-LeucineI類組織相容性H-2抗原D-Dalpha鏈抗體包裝1g
徐長卿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-TheanineHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5A蛋白抗體包裝5g
續(xù)斷(川續(xù)斷)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Theanine熱休克蛋白70抗體包裝1g
續(xù)斷苷A英文名稱: D-Glucuronic acid羥類固脫氫17β抗體(17β-HSD8)包裝5g
續(xù)斷苷B英文名稱: L(+)-allo-Threonine透明質(zhì)結(jié)合蛋白4抗體包裝250mg
玄參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lysine acetateA型流感病H5N1凝集抗體包裝100ml
旋覆花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Cystine dimethyl ester dihydrochlorideA型流感病核衣殼蛋白抗體包裝100g
雪膽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GSK-2636771A型流感病核衣殼蛋白抗體包裝500g
雪膽乙英文名稱: N-Cbz-L-threonine Benzyl EsterA型流感病核衣殼蛋白抗體包裝1g
雪上一支蒿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-2-Methyl-L-serineB型流感病蛋白抗體包裝5g
雪上一枝蒿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3,3-Diphenyl-L-alanine人類狀瘤病16-E7抗體包裝100g
血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: α-Methyl-L-phenylalanine跨膜蛋白絲1抗體包裝25g
血竭(麒麟竭)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride肺癌癌基因蛋白3抗體包裝5g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%落葉型天皰瘡抗體試劑盒1-咖啡??鼘?1-Caffeoylq
舟形毛殼Chaetomium│cymbiforme 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%,BR,可用于培養(yǎng)絡(luò)試劑盒康普瑞汀磷二鈉;Combretasta
酵母屬Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%;ATP競爭性PI3K和mTOR抑制劑輪狀病抗原試劑盒康普瑞汀;Combretastatin
RNA聚合酶抑制劑(Beclabuvir)異類葉升麻苷;異毛蕊花糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
異蓮心(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
異綠原A(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
異綠原B(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
異綠原C(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
異羅漢果皂苷 VHuman
異芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
異牡荊(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
異南五味子木脂寧Human