商品介紹:
ML-7hydrochloride是一種萘磺酰胺衍生物,有效抑制MLCK(IC50=300nM)和TRPC6通道(IC50>10μM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):110448-33-4 純度:98.18% 分子量:452.74 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
MLCK和TRPC6通道抑制劑 | ML-7 hydrochloride | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
枯草芽孢桿菌G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB10抗體Anti-EPS15 Antibody胰蛋白(PANCPIN)
枯草芽孢桿菌G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB11a抗體Anti-ERBB2 Antibody胰彈性蛋白(ELA1)
小鏈霉菌G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB6A抗體Anti-ERBB3 Antibody胰安肽(Aglycin)
弗吉尼亞鏈霉菌RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB17抗體Anti-ERBB4 Antibody伊默菌(EMD)
短波單胞菌屬G蛋白結(jié)合蛋白R(shí)AB38抗體Anti-ERBB4 Antibody一氧化氮合運(yùn)輸因子(NOSTRIN)
玫瑰產(chǎn)色鏈霉菌DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad50抗體Anti-ERCC1 Antibody一氧化氮合相互作用蛋白(NOSIP)
枯草芽孢桿菌RecQ解旋樣蛋白5抗體Anti-ERCC6 Antibody夜盲蛋白(NYX)
扣囊復(fù)膜孢酵母(備貨)RecQ解旋樣蛋白5抗體Anti-ERCC3 Antibody葉轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FOLT)
Jeotgalicoccus aerolatus單鏈結(jié)合蛋白70抗體Anti-EREG Antibody葉受體1(FOLR1)
好食脈孢霉視網(wǎng)膜S抗原抗體Anti-ERK5/MAPK7 Antibody野鼠色基因相關(guān)蛋白(AGRP)
柑橘炭疽盤孢受體活性修飾蛋白2抗體Anti-ERM/Etv5 Antibody樣糖基轉(zhuǎn)移(LARGE)
Bacillus methylotrophicus受體活性修飾蛋白3抗體Anti-ERN1 Antibody氧鯊烯環(huán)化(OSC)
泡盛曲霉Ras蛋白特異鳥(niǎo)嘌呤核苷釋放因子1抗體Anti-ERV3-1 Antibody氧橋二十烷受體1(OXER1)
黑腐皮殼菌RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab35抗體Anti-ESM1 Antibody氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長(zhǎng)抑制因子1(OSGIN1)
立枯絲核菌磷化Rho GTP激活蛋白GAP抗體Anti-ERVW-1 Antibody氧固結(jié)合蛋白樣蛋白8(OSBPL8)
美澳型核果褐腐病菌軸突導(dǎo)向受體蛋白2抗體Anti-ESR1 Antibody眼質(zhì)蛋白(OCLM)
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
川西氏菌Henriciella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
茯苓Poria│cocos 質(zhì)量規(guī)格:0.98
MLCK和TRPC6通道抑制劑液化根霉 新生霉炭疽桿抗原Elisa
三葉草根瘤 mTSB肉湯磷酸化腺苷酸活化蛋白激Elisa
灰褐鏈霉 mEC肉湯同型半胱氨酸Elisa
芽胞桿 4-甲基傘形酮-D-葡萄糖酸苷(MUG)磷酸肌酸激Elisa
黑曲霉 醋酸鹽瓊脂D二聚體Elisa
根瘤 m-TEC瓊脂乳酸Elisa
黑孢霉屬 m-TGE肉湯旋毛蟲(chóng)IgG抗體Elisa
雙環(huán)林地蘑菇 LesEndo瓊脂流行性腹瀉病Elisa
枯草芽孢桿 胰胨大豆胨固綠瓊脂喹啉酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移Elisa
圓紅球 濾膜腸球瓊脂煙酰腺嘌呤二核苷酸Elisa
泡盛曲霉 哥倫比亞CNA瓊脂基礎(chǔ)絨毛膜促性腺Elisa
熒光假單胞 A1培養(yǎng)基I型原膠原N端前肽Elisa
解幾丁質(zhì)類芽孢桿 標(biāo)準(zhǔn)II號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂藍(lán)耳病抗體Elisa
黑曲霉 標(biāo)準(zhǔn)I號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂口蹄疫病抗體Elisa
鈉線屬 Tergitol-7瓊脂缺氧誘導(dǎo)基因1蛋白Elisa