以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PAK小分子抑制劑(FRAX1036) | FRAX1036 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
FRAX1036是新型ATP競爭性的PAK小分子抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1432908-05-8 純度:98.0% 分子量:518.05 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Bacillus safensis Satomi et al. 粘附分子整合β1抗原Anti-CST2 Antibody人干因子受體(SCFR)
啤酒酵母粘附分子整合α5抗原Anti-CST9L Antibody人干因子受體(SCFR)
球孢白僵菌整合αV抗原Anti-CSTF1 Antibody人干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
金針菇8號(hào)蛋白質(zhì)酪激JAK-1抗原Anti-CST8 Antibody人干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
麥克默多生孢八疊球菌蛋白質(zhì)酪激JAK-2抗原Anti-CSTF2 Antibody人可溶性CD40配體(sCD40L)
樟疫霉磷化蛋白酪激JAK-2抗原Anti-CSTF2T Antibody人可溶性CD40配體(sCD40L)
粘質(zhì)沙雷氏菌c-Jun基末端激1/3多肽抗原Anti-CSTF2T Antibody人可溶性CD30配體(sCD30L)
柳屬半明小黑腐皮殼菌磷化基末端激1/2/3(pJNK1/2/3)抗原Anti-CTCF Antibody人可溶性CD30配體(sCD30L)
大腸埃希菌Ki-67 AntigenAnti-CSTL1 Antibody人正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)
釀酒酵母腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原Anti-CTCFL Antibody人正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)
小孢毛霉磷化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原Anti-CSTL1 Antibody人P選擇(P-Selectin/CD62P/GMP140)
大腸埃希氏菌磷化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原Anti-CTDSP1 Antibody人P選擇(P-Selectin/CD62P/GMP140)
柑橘葡萄座腔菌乳脫氫抗原Anti-CTPS1 Antibody人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)
委內(nèi)瑞鏈霉菌瘦受體Anti-CTPS1 Antibody人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)
香菇脂蛋白磷脂A2抗原Anti-CTSB Antibody人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)
根瘤菌腸上皮干蛋白(多肽)Anti-CTLA4 Antibody人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)
凋亡相關(guān)蛋白6抗體冬蟲夏草人乳腺癌細(xì)胞(黑瘤細(xì)胞)
凋亡相關(guān)蛋白7抗體蟲草人宮頸上皮永生化細(xì)胞
調(diào)亡誘導(dǎo)因子家族蛋白PEF1抗體臥孔菌人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞
性核磷蛋白32家族B抗體蜜粘褶菌=革裥菌人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
PAK小分子抑制劑(FRAX1036)弓形蟲(GTS-3株) Vibsanin C
副溶血弧 Venoterpine
玫紅假裸囊 Vasicinolone
森青霉 三萜酸 A
淺黃灰漫游孢囊 Trilobatin 2''-acetate
Neofusicoccum australe Trichokaurin
根瘤 Tetrahydrolachnophyllum lactone
芽孢桿屬 Tetrachyrin
火神地芽孢桿 繡線菊堿 F
匍匐曲霉原變種 Spegatrine
殼 Sequosempervirin B
柱狀環(huán)傘(柳菇、茶新菇) Sanggenol A
短小芽孢桿 Prionitin
釀酒酵母 Palbinone
枯草芽孢桿 Paeonilactone B