商品介紹:
STAT5-IN-1是STAT5的抑制劑,對(duì)STAT5β亞型的IC50值為47μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):285986-31-4 純度:98.0% 分子量:293.28 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
節(jié)桿菌人紅激因子Anti-MRPL41 Antibody人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)
小麥斑鏈格孢大鼠血管緊張ⅡAnti-MRPL4 Antibody人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)
茯苓菌小鼠還原型Anti-MRPL44 Antibody人單純皰疹?、蛐涂贵w(HSVⅡ-Ab)
雞傷寒沙門氏菌植物乙Anti-MRPL47 Antibody人單純皰疹?、蛐涂贵w(HSVⅡ-Ab)
蘇云金芽胞桿菌猝倒亞種大鼠可溶性白介6受體Anti-MRPL50 Antibody人雌激誘導(dǎo)蛋白PS2
側(cè)耳兔可溶性凋亡相關(guān)因子Anti-MRPL46 Antibody人雌激誘導(dǎo)蛋白PS2
糞腸球菌人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子Anti-MRPL49 Antibody人細(xì)菌性病(BV)
假單胞菌屬兔6前列腺F1aAnti-MRPL52 Antibody人細(xì)菌性病(BV)
豌豆根瘤菌小鼠肌鈣蛋白TAnti-MRPL54 Antibody人單純皰疹?、裥涂贵w(HSVⅠAb)
毛頭鬼傘,雞腿菇大鼠吡啶Anti-MRPL54 Antibody人單純皰疹?、裥涂贵w(HSVⅠAb)
釀酒酵母麥胚凝集/凝集蛋白Anti-MRPL9 Antibody人雌激誘導(dǎo)蛋白PS2
緊密假諾氏菌人生長激釋放因子Anti-MRPL51 Antibody人雌激誘導(dǎo)蛋白PS2
梭菌大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解2Anti-MRPS16 Antibody人狀瘤病抗體IgM(HPV-IgM)
托姆青霉小鼠c-fosAnti-MRPS18C Antibody人狀瘤病抗體IgM(HPV-IgM)
泛枝芽胞桿菌荊豆凝集Anti-MRPS12 Antibody人狀瘤病抗體IgG(HPV-IgG)
腫塊芽孢桿菌屬兔血栓B2Anti-MRPS17 Antibody人狀瘤病抗體IgG(HPV-IgG)
RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位2抗體蘋果黑腐皮殼菌雞肝癌細(xì)胞
維甲誘導(dǎo)蛋白1抗體白腐盾殼霉人卵巢癌細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體三骨菇人急性淋白血病細(xì)胞
Rab溶體相互作用蛋白樣2抗體高盧蜜環(huán)菌小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長激分泌激)
STAT5抑制劑(STAT5-IN-1)香菇 環(huán)桑色烯
托姆青霉 Xanthoxyletin
金黃色葡萄球 大豆腦苷 II
Rhizobium lusitanum 大豆腦苷 I
鐘器腐霉 Sophoraflavanone G
鐮孢屬 千里光靈
巴克紅曲霉 Secologanin dimethyl acetal
腐皮殼 Rehmannic acid
乳酸乳球乳亞種 Pseudotaraxasterol
釀酒酵母 Piperlotine A
黃曲霉 菜豆蛋白
植物乳桿 菜豆
香菇 O-Geranylconiferyl alcohol
黑曲霉 N-對(duì)反式香豆酰酪
樹舌靈芝 鬧達(dá)柯裂亭