商品介紹:
3PO是一種新型小分子PFKFB3同工酶的抑制劑,顯著衰減幾個(gè)人惡性造血細(xì)胞和腺癌細(xì)胞系的增殖(IC50為1.4-24μM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):18550-98-6 別名:3PO (inhibitor of glucose metabolism) 純度:99.29% 分子量:210.23 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蘇云金芽孢桿菌大鼠干因子受體Anti-SSBP1 Antibody人凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)
綠色木霉大鼠基質(zhì)衍生因子1βAnti-SSBP2 Antibody人抗凝血受體(ATR)
茶樹菇人落葉型天皰瘡抗體Anti-SSTR4 Antibody人抗凝血受體(ATR)
大腸埃希菌人β2糖蛋白1抗體IgAAnti-SSX1 Antibody人凝血受體(TR)
孢小克銀漢霉大鼠血管生成受體Tie1Anti-SSH3 Antibody人凝血受體(TR)
地衣芽孢桿菌大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2Anti-ST18/Znf387 Antibody人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)
山茶盤孢人抗心磷脂抗體IgAAnti-SSH3 Antibody人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)
枯草芽孢桿菌枯草亞種大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2Anti-ST3GAL3 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)
淡紫擬青霉人β2糖蛋白1抗體IgMAnti-STAC2 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)
耐堿放線孢菌人β2糖蛋白1抗體IgGAnti-ST6GAL1 Antibody人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)
Bacillus tequilensis大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3Anti-STARD10 Antibody人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)
粟酒裂殖酵母大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4Anti-STARD13 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
黑曲霉人抗心磷脂抗體IgMAnti-STEAP2 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
乙鈣不動(dòng)桿菌人抗心磷脂抗體IgGAnti-STEAP4 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)
大腸埃希氏菌大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠAnti-STARD13 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)
產(chǎn)短桿菌人抗高爾基體抗體Anti-STEAP3 Antibody人淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)
甲狀腺激反應(yīng)蛋白抗體天麻蜜環(huán)菌(京-234)抗P24蛋白單抗7
跨膜蛋白49抗體茯苓578抗人大腸癌單抗7
腫瘤/睪丸抗原20抗體黑木耳(東A-3)抗人微管蛋白-alpha單抗7
腫瘤蛋白D54蛋白抗體散囊菌抗人醛羧A單抗7
小分子PFKFB3同工酶抑制劑(3PO)堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 異肥皂草苷
黏液桿 異紫堇定堿
纖維鏈霉 銀杏雙黃酮
擬郎比可假絲酵母 魚藤
金灰青霉 異銀杏雙黃酮
屎腸球 異丁酰紫草
黃曲霉 乙酰紫草
熱帶假絲酵母 異丹葉大黃
牛病性腹瀉病 7-乙基
赭曲霉 異連翹酯苷A
Marisediminicola 氧海堿
地衣芽孢桿 異莨菪亭
嗜酸寡養(yǎng)單胞 乙酰天麻
嗜水氣單胞 氧化白藜蘆
蘇云金芽孢桿 乙?;邹继J