Akt和PDPK1雙重抑制劑(PHT-427)

Akt和PDPK1雙重抑制劑(PHT-427)公司正在出售的產(chǎn)品：ELAVL1/HuR/FITC 熒光標(biāo)記ELAVL1抗體IgG納米銅粉 99.9% metals basis,80-100nm
Elastin/Gold 金標(biāo)記抗彈性蛋白抗體IgG鈷 99.5%，300目
ELK1/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體IgG鎳 AR,99.5%
Endo G /FITC 熒光標(biāo)記核內(nèi)切G抗

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

新城疫病人可溶性腫瘤壞死因子α受體Anti-NCBP2 Antibody人葡萄球菌蛋白A(SPA)

橄欖色盾殼霉大鼠促性腺激釋放激受體Anti-NCK2 Antibody人葡萄球菌蛋白A(SPA)

沃氏葡萄球菌大鼠磷化腺苷活化蛋白激Anti-NCOA4 Antibody人刀豆A(ConA)

泡囊短波單胞菌兔超敏C反應(yīng)蛋白Anti-NCOA3 Antibody人刀豆A(ConA)

構(gòu)巢曲霉植物維生DAnti-NCLN Antibody人游離原卟啉(FEP)

熱帶假絲酵母小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子Anti-NCF4 Antibody人游離原卟啉(FEP)

白色念珠菌人可溶性因子受體Anti-NCK2 Antibody人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)

木賊鐮刀菌人可溶性凋亡相關(guān)因子配體Anti-NCoR1 Antibody人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)

板栗蛇孢日規(guī)殼植物維生B6Anti-NCOA5 Antibody人過氧化(GSH-Px)

深紅正青霉兔基質(zhì)金屬蛋白1Anti-NCOA7 Antibody人過氧化(GSH-Px)

球孢白僵菌小鼠骨成型蛋白2Anti-NCR2 Antibody人(GSH)

釀酒酵母大鼠熱休克蛋白47Anti-NDC80 Antibody人(GSH)

釀酒酵母人凋亡抑制因子Anti-NCS1 Antibody人17-類固(17-KS)

葡萄座腔菌小鼠骨成型蛋白4Anti-NDUFA4 Antibody人17-類固(17-KS)

栗色渾圓鏈霉菌植物25羥基維生D3Anti-NDUFA4 Antibody人17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)

離中不粘柄菌兔8-異構(gòu)前列腺Anti-NDUFA3 Antibody人17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)

視黃脫氫13抗體蘇云金芽孢桿菌東北亞種人子宮鱗癌細(xì)胞（高分化）

環(huán)指蛋白160抗體蘇云金芽孢桿菌九州亞種TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞

E3泛蛋白連接144A抗體蘇云金芽孢桿達姆斯塔特亞種人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞

RGAG4蛋白抗體丁香假單胞菌丁香致病變種人甲狀腺癌細(xì)胞KHM-5M（干細(xì)胞庫保藏）
Akt和PDPK1雙重抑制劑(PHT-427)盲腸腸球 Eriodictyol 7-O-glucoside

薄花邊傘7-5 Eichlerialactone

單胞 疏展香茶菜寧 A

費氏中華根瘤 槐亭

約氏乳桿 Dihydropinosylvin methyl ether

放線多孢 Dihydroalpinumisoflavone

暗點雙座炭殼 赤芝酮

氏富鹽 地黃苷

冬蟲夏草 Methyl β-D-fructofuranoside

黑附球 三裂尾草（供應(yīng)商少）

匍匐曲霉 甲基異石榴皮堿

竹喙球 丹寧

蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 松馳D

宇佐曲霉 柳杉二

放線 Confluentic acid