商品介紹:
VER-155008是Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑,對(duì)HCT116細(xì)胞GI50值為5uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1134156-31-2 純度:98.83% 分子量:556.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
木賊鐮孢菌P-鈣粘附分子抗體Anti-AHR Antibody單核增多性李斯特菌O((LLO)
淺灰白鏈霉菌腺苷環(huán)化激活肽-38抗體Anti-AHSA1 Antibody單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
假單胞菌屬腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53)Anti-AHR Antibody單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)
釀酒酵母腫瘤抑制基因p63α抗體Anti-AIF1 Antibody單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)
玉米大斑病菌磷二酯4A8抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白2(MCP-2)
薄花邊傘血小板源性生長(zhǎng)因子AB+BB抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)
東方伊薩酵母增殖核抗原抗體Anti-AHSG Antibody單核趨化蛋白1(MCP-1)
棲熱菌腦特異性多肽蛋白19抗體Anti-AICDA Antibody單氧化(MAO)
金龜子綠僵菌三磷腺苷門(mén)控陽(yáng)離子通道蛋白抗體Anti-AIFM1 Antibody帶3蛋白(Band3)
枯草芽孢桿菌硫氧還蛋白過(guò)氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體Anti-AIFM1 Antibody大皰性類(lèi)天皰瘡抗體(BP)
鴨肝炎病p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體Anti-AIFM1 Antibody(PB0388)大內(nèi)皮(Big ET-1)
交鏈孢磷核糖咪唑羧化抗體Anti-AIMP2 Antibody大內(nèi)皮(Big ET)
*無(wú)色桿菌神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體抗體Anti-AIM2 Antibody(PB0721)大腸菌(colicin)
果生鏈核盤(pán)菌腫瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS1抗體Anti-AIP Antibody大腸癌專(zhuān)一抗原4(CCSA-4)
貝氏葡萄座腔菌腺苷單磷活化蛋白激γ2抗體Anti-AIRE Antibody大腸癌專(zhuān)一抗原3(CCSA-3)
焦曲霉血小板衍化生長(zhǎng)因子β抗體Anti-AKAP2 Antibody大腸癌專(zhuān)一抗原2(CCSA-2)
細(xì)極鏈格孢Alternaria│tenuissima (Kunze) Wiltshire 質(zhì)量規(guī)格:>99%
病毒Influenzavirus A│Avian influenza virus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%
Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑(VER-155008)野油菜黃單胞(甘藍(lán)黑腐病黃單胞,野油菜桿) 3,3'4,4'-二苯甲酮四羧酸二酐Dickkopf 1Elisa
香菇 改良磷酸鹽緩沖液(PSB)4E結(jié)合蛋白1Elisa
亞洲盤(pán)孢 改良磷酸鹽緩沖液(PSB)可溶性血管黏附因子Elisa
孟氏假單胞 FB2增液CXC趨化因子配體2Elisa
彩色豆馬勃 李氏增肉湯LB2基質(zhì)衍生因子1Elisa
雜色曲霉 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬(wàn)古霉瘟抗體Elisa
色褐鏈霉 3,3',4,4'-聯(lián)苯四甲酸二酐前列腺EElisa
梭 M肉湯血脂Elisa
Enterobacter SBG增液晚期氧化蛋白產(chǎn)物Elisa
枯草芽胞桿 鹽胱氨酸增液(SC)硬骨Elisa
普通變形桿* N(e)-Boc-L-賴(lài)氨酸I型膠原羥基端肽α降解產(chǎn)物Elisa
不等彎孢 RV肉湯內(nèi)皮特異性分子Elisa
大腸埃希氏 雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(含小倒管)骨髓觸發(fā)受體-1Elisa
短小芽孢桿 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(含小倒管)心肌肌鈣蛋白Elisa
腐皮殼 單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管(含小倒管)環(huán)氧合1Elisa