商品介紹:
USP7-IN-1是新型USP7選擇可逆性小分子抑制劑,IC50值為33uM,對(duì)USP5、USP8、Uch-L1、Uch-L和Caspase的抑制劑弱或無(wú)(IC50>200uM),對(duì)HCT116細(xì)胞GI50值為67uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1381291-36-6 純度:99.77% 分子量:425.91 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蠟狀芽孢桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
黑曲霉Pseudomonas fluorescens大鼠環(huán)孢A(CsA)
桿狀毛霉Pseudomonas fluorescens大鼠環(huán)孢A(CsA)
波氏假性阿什霉Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)
三葉草根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)
洛斯里被毛孢Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
金福菇Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
壁芽孢桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種Pseudomonas fluorescens大鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)
裂褶菌Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)
釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)
草木樨中華根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
平菇(PL185)Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
大豆慢生根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
沃氏富鹽菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
油菜假單胞菌Pseudomonas fluorescens大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)
早老蛋白-1抗體苜蓿莖點(diǎn)霉超氧化物歧化(SOD)分型測(cè)試盒(羥胺法)
突觸后密度蛋白95抗體污黑腐皮殼總超氧化物歧化(T-SOD)比色法測(cè)試盒(羥胺法)
一種腫瘤抑制基因抗體N端禾谷鐮孢菌還原(GR)比色法測(cè)試盒
甲狀旁腺激相關(guān)蛋白抗體三隔鐮刀菌總超氧化物歧化(SOD)比色法測(cè)試盒(WST-1 法)
USP7小分子抑制劑(USP7-IN-1)威德摩爾鏈霉 硫酸葡聚糖
鴨疫里氏桿 硫酸葡聚糖
根瘤 老鸛草
根瘤 硫酸葡聚糖
黑青霉 三七皂苷R2(R型)
大腸桿 DEAE葡聚糖凝膠A-50
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 三七皂苷Ft1
無(wú)花果曲霉 DEAE葡聚糖凝膠A-25
薛瓦酵母 葡聚糖凝膠QAE-A50
長(zhǎng)孢黃色鏈霉 麥角甾
白色中華單胞 葡聚糖凝膠QAE-A25
禾谷 SP葡聚糖凝膠C-50
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 SP葡聚糖凝膠C-25
解糖鹽球 紫花前胡苷
生根根瘤 羧甲基葡聚凝膠C-50