SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)

SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)公司正在出售的產(chǎn)品：Phospho-EGFR(Tyr998) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化表皮生長因子受體抗體IgG氫化鋰 95%
EGF(mouse)/FITC 熒光標(biāo)記表皮生長因子抗體(小鼠)IgG氫化鋰 2.0M四溶液
HB-EGF/DTSF/FITC 熒光標(biāo)記肝結(jié)合性表皮生長因子抗體IgG吡啶-2- 98%
EGF/FITC

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)

英文名稱：PF-543 Citrate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

櫟小皮傘大鼠肉堿脂酰轉(zhuǎn)移Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)

大腸埃希氏桿菌兔子補(bǔ)體片斷3aAnti-NECTIN1 Antibody人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)

枯草芽孢桿菌小鼠溶菌Anti-NEDD1 Antibody人鈣調(diào)磷(CaN)

鍋孢霉人CD14分子Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調(diào)磷(CaN)

栗酒裂殖酵母人凋亡誘導(dǎo)因子Anti-NECTIN3 Antibody人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

耐輻射奇球菌兔子基質(zhì)金屬蛋白3Anti-NEFH Antibody人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

白僵菌大鼠磷化乙酰羧化Anti-NEFH Antibody人鈣結(jié)合蛋白(CR)

釀酒酵母小鼠可溶性CD30Anti-NEFL Antibody人鈣結(jié)合蛋白(CR)

臭曲霉兔磷TRAP-5b Anti-NEDD4 Antibody 人骨形成蛋白6(BMP-6)

冠突曲霉人白共同抗原Anti-NEFL Antibody人骨形成蛋白6(BMP-6)

冷桿菌兔子可溶性CD40配體Anti-NEFM Antibody人脂肪結(jié)合蛋白(FABP)

聚生殼菌小鼠可溶性肌球蛋白重鏈Anti-NEIL3 Antibody人脂肪結(jié)合蛋白(FABP)

海洋桿菌大鼠金屬硫蛋白Anti-NEGR1 Antibody人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)

膜醭畢赤酵母大鼠心肌特異性肌鈣蛋白TAnti-NEIL3 Antibody人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)

化妝品 霉、甲硝唑小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1Anti-NEFM Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)

釀酒酵母兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類Anti-NEK2 Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)

胰島β細(xì)胞生長因子抗體邊莢魚藤根瘤菌人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白149抗體假地豆根瘤菌人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

心臟蛋白磷1結(jié)合蛋白/環(huán)指蛋白158抗體波葉山螞蟥根瘤菌人胎盤絨毛癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白180抗體本氏木蘭根瘤菌人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞
SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)紫紅牛肝 9-Hydroxycalahone

天藍(lán)色鏈霉 銅

釀酒酵母 檸檬酸銅

糞腸球 雙環(huán)己酮草酰二腙

枯斑擬盤多毛孢 羥溶液

無色桿 硫酸鈰

蒼白彎孢 鉑酸

根瘤 聚乙烯磷酸

新月彎孢 芐基三乙基化

銅綠假單胞 

酵母屬 吡咯烷二硫代甲酸鹽

紫色紅曲 甲酸

三聚速測 草酸高鐵

鏈格孢 五酸

德氏乳桿乳酸亞種 鎢酸