TPase抑制劑(Tipiracil)

TPase抑制劑(Tipiracil)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-PEDF /FITC 熒光素標(biāo)記色素上皮源性因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-human serum albumin/Gold 金標(biāo)記羊抗人白蛋白(10/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml
雌激素受體 Anti-ER 0.1ml
Do

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
蠟狀芽孢桿菌Ensifer fredii

黑曲霉Azotobacter vinelandii

丁香假單胞菌Ensifer fredii

大毛霉Ensifer fredii

陰溝腸桿菌Corynebacterium crenatum

慢生新鞘菌Xanthomonas oryzae

變灰青霉Xanthomonas oryzae

蘑菇2796Brevibacillus laterosporus

pGADT7 ADMicrococcus varians

米根霉Paenibacillus polymyxa

河生雷勒特氏菌Enterobacter aerogenes

羅倫隱球酵母Paenibacillus polymyxa

CystofilobasidiumBradyrhizobium japonicum

局限青霉Mesorhizobium huakuii

 纖維堆囊菌Bradyrhizobium japonicum

膠凍樣類(lèi)芽孢桿菌Corynebacterium ammoniagenes

豬基質(zhì)衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫試劑盒頂膜鈉依賴(lài)性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 赤松

豬基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒去整合樣金屬蛋白8抗體人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 赤芝A

豬基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)免疫試劑盒芳香乙酰脫乙?；鶚拥鞍?抗體人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 赤芝B

豬基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒ACN9蛋白抗體人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 赤芝C
TPase抑制劑(Tipiracil)Nuclear protein stromal antigen 1 英文名稱(chēng)： 粘結(jié)蛋白SA1抗體 0.2ml

Phospho-EGFR (Ser1045) 英文名稱(chēng)： 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml

可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體 Anti-Slc22A17 0.2ml

Anti-Tenascin/TN /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞粘合素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MCAM(Tyr641) 磷酸化黑色素瘤細(xì)胞粘附分子CD146抗體 規(guī)格 0.1ml

Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2) β-抑制蛋白1/2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg