商品介紹:
G007-LK是Tankyrase高效選擇性抑制劑,對tankyrase1和tankyrase2的體外生化IC50值分別為46nM和25nM,細(xì)胞水平IC50為50nM,小鼠模型體內(nèi)有很好的動力學(xué)參數(shù)。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1380672-07-0 純度:99.24% 分子量:529.96 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
膠孢人補(bǔ)體片斷3aBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠狀腺原(T3)
綠穗霉人Ⅷ相關(guān)抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)
哈茨木霉人ⅨBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)
枯草芽孢桿菌人ⅩBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)
束狀盤孢人血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)
Rhizobium人纖溶抗纖溶復(fù)合物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠17羥孕(17-OHP)
爾斯伯酵母人凝血抗凝血復(fù)合物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠17羥孕(17-OHP)
解肝磷脂土地桿菌人抗凝血受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠卵泡抑(FS)
中國臺灣卓貝爾氏菌人凝血受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠卵泡抑(FS)
香菇*人第八因子相關(guān)抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠組織蛋白去乙酰化(HD)
成晶節(jié)桿菌人血纖蛋白原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠組織蛋白去乙?;?HD)
多脂鱗傘人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌三(E3)
枯草芽孢桿菌人抗凝血Ⅲ抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌三(E3)
蘇云金芽孢桿菌太平洋亞種人血栓前體蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雄烯二(ASD)
柱狀田頭菇(茶樹菇、楊樹菇)人淋巴功能相關(guān)抗原3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雄烯二(ASD)
巴貝斯蟲(青海貴南株)人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游離睪(F-TESTO)
鋅指蛋白354C抗體厚垣輪枝孢菌人惡性霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞
白血病相關(guān)新基因抗體淡紫擬青霉犬蝠皮膚細(xì)胞
斑聯(lián)蛋白抗體氧化烴微桿菌犬蝠肺細(xì)胞
鋅指蛋白307抗體九州蟲草高背鯽魚尾鰭細(xì)胞
Tankyrase抑制劑(G007-LK)球形芽孢桿 霉酸
葡萄座腔 光神霉
類芽孢桿屬 5-氟
長谷川赤擔(dān)孢酵母 地紅霉
雞傷寒沙門氏 硫酸阿布霉
莖點霉屬 哌西林
達(dá)氏擬諾氏達(dá)氏亞種 硫酸核糖霉
白井盤多毛孢 環(huán)孢A
根瘤 萘啶酮酸
抗性微桿 蟛蜞菊內(nèi)酯
不吸水鏈霉 哌西林鈉
生輪枝孢 苯唑西林鈉
大腸埃希氏 乙酰纈草三酯
Klebsiella oxytoca strain CAV1374(產(chǎn)酸克雷伯氏) 纈草三酯
潘諾尼亞鎖霉 鹽酸強(qiáng)力霉