以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
EED inhibitor-1是EED的抑制劑,來自US20160176882A1,化合物實(shí)例2;在EED Alphascreen,LC-MS和ELISA試驗(yàn)中的IC50s值分別為59,89,26nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1951408-58-4 純度:98.05% 分子量:376.39 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)ELISA Kit英文名稱:TNNT2 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)ELISA Kit英文名稱:TNNI3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框64抗體包裝1g
小核糖核蛋白多肽D1(SNRPD1)ELISA Kit英文名稱:SNRPD1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框66抗體包裝5g
硝基酪(NT)ELISA Kit英文名稱:NT ELISA Kit9號染色體開放閱讀框68抗體包裝25g
腺苷環(huán)化10(ADCY10)ELISA Kit英文名稱:ADCY10 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框7抗體包裝5g
腺苷A2b受體(ADORA2b)ELISA Kit英文名稱:ADORA2b ELISA Kit9號染色體開放閱讀框71抗體包裝1g
線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)ELISA Kit英文名稱:TFAM ELISA KitK-酪蛋白抗體包裝250mg
線粒體乙醛脫氫(ALDM)ELISA Kit英文名稱:ALDM ELISA Kit20號染色體開放閱讀框26抗體包裝100g
線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)ELISA Kit英文名稱:UCP1 ELISA KitC2CD4D蛋白抗體包裝25g
線粒體肌激1A(CKMT1A)ELISA Kit英文名稱:CKMT1A ELISA Kit二硫鍵氧化還原鋅指蛋白5抗體包裝1g
纖維介蛋白(FGL2)ELISA Kit英文名稱:FGL2 ELISA KitL-型電壓依賴型鈣通道β抗體包裝1g
纖維膠凝蛋白1(FCN1)ELISA Kit英文名稱:FCN1 ELISA Kit過氧化氫抗體包裝5g
纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)ELISA Kit英文名稱:FGL1 ELISA Kit色P450 2C19抗體包裝1g
纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA Kit英文名稱:FDP ELISA Kit心肌特異性肌鈣蛋白T抗體包裝25g
纖維蛋白原β(FGβ)ELISA Kit英文名稱:FGβ ELISA KitCD161抗體包裝5g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A試劑盒乙肝表面(HBs)抗體血漿品
苜蓿中華根瘤菌Sinorhizobium│meliloti 質(zhì)量規(guī)格:BR,>99%,培養(yǎng)級組織多肽特異性抗原試劑盒乙肝表面(HBs)抗體免疫球蛋白
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品組織多肽抗原試劑盒抗A,(單克抗體)
EED抑制劑(EED inhibitor-1)胎盤生長因子抗體(S)-西酞普蘭N-氧化物 2,7-Dibromo-9,9-di-n-octylfluorene
蛋白激A抗體(S)-西替利 2,5-Dibromothiazole
蛋白激C beta 1/2抗體(S)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷 2,5-Dibromoselenophene
胎盤生長因子抗體(S)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷芐酯 2,6-Dibromonaphthalene
胎盤生長因子抗體(S)-腺苷,環(huán)3',5'-(氫化硫代磷酯)三乙 1,3-Dibromo-7-tert-butylpyrene
外周髓鞘蛋白-22抗體(S)-鹽奧昔布寧 6,12-Dibromochrysene
平足蛋白抗體(淋巴管內(nèi)皮蛋白)(S)-鹽氮卓斯汀 9,9-Dimethyl-9H-9-silafluorene
蛋白磷酯-1B抗體(S)-鹽2,7-Dibromophenanthrene-9,10-dione
蛋白質(zhì)磷-2A抗體(S)-鹽樂卡地平 Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride